[发明专利]斑马鱼肺炎克雷伯菌感染模型、其构建方法及评价方法有效
| 申请号： | 202110127478.0 | 申请日： | 2021-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN112889713B | 公开（公告）日： | 2023-07-28 |
| 发明（设计）人： | 王明勇;刘君 | 申请（专利权）人： | 苏州木芮生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A01K61/10 | 分类号： | A01K61/10 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理有限公司 11369 | 代理人： | 靳浩 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市苏州工业*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 斑马 肺炎 克雷伯菌 感染 模型 构建 方法 评价 | ||
【权利要求书】：
1.一种斑马鱼肺炎克雷伯菌感染模型的构建方法，其特征在于，包括：挑选发育正常的斑马鱼通过浸入细菌液的手段获得斑马鱼肺炎克雷伯菌感染模型；所述斑马鱼为受精3天后的斑马鱼幼鱼；所述细菌液的制备方法如下：将肺炎克雷伯菌细菌培养物生长到指数相OD600＝0.4±0.6，离心、洗涤，随后分散于灭菌的E3培养液中，得到细菌液；所述浸入细菌液的手段具体为将斑马鱼浸入细菌液中，28.5℃恒温孵育72h。
2.一种如权利要求1所述的构建方法构建出的斑马鱼肺炎克雷伯菌感染模型。
3.一种使用权利要求2所述的斑马鱼肺炎克雷伯菌感染模型对炎症细胞的评价方法，其特征在于，至少包括以下步骤：
1)对斑马鱼肺炎克雷伯菌感染模型进行巨噬细胞和中性粒细胞染色；
2)于显微镜下观察中性粒细胞和巨噬细胞的变化，以此获得对肺炎克雷伯菌感染斑马鱼模型后炎症细胞的评价结果；
其中，所述巨噬细胞染色方法为：将斑马鱼肺炎克雷伯菌感染模型浸于4％甲醛溶液中，用PBST缓冲液冲洗，随后用苏丹黑B染色，观察巨噬细胞；
所述中性粒细胞染色方法为：将斑马鱼肺炎克雷伯菌感染模型浸于4％甲醛溶液中，用PBST缓冲液冲洗，之后用70％乙醇洗涤，置于2.5mg/L的中性红染料溶液中培养，观察中性粒细胞。
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