[发明专利]双特异性CS1-BCMA CAR-T细胞及其应用

说明书

本发明提供了一种双特异性CS1‑BCMA CAR‑T细胞及其应用。具体地，本发明提供了一种双特异性CAR，其包含CS1scFv和BCMA scFv，以及4‑1BB共刺激域和CD3激活域。本发明的双特异性CAR‑T细胞对CS1阳性靶细胞和BCMA阳性靶细胞有显著的杀伤作用，能够针对靶细胞分泌IFN‑γ，并在体内实验中，显著抑制RPMI8226异种移植肿瘤的生长。本发明还提供了上述双特异性CAR‑T细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及一种双特异性CS1-BCMA CAR-T细胞及其应用。

背景技术

免疫疗法正在成为一种非常有前景的癌症治疗方法。T细胞或T淋巴细胞是免疫系统的有效武器，能够持续性地从正常细胞中搜寻外来抗原或非正常细胞(如癌细胞或被感染细胞)。用CAR(嵌合抗原受体)构建物对T细胞进行遗传修饰是设计肿瘤特异性T细胞的最常见方法。将靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR-T细胞输入患者(称为过继细胞转移或ACT)，代表了一种有效的免疫治疗方法。与化学疗法或抗体相比，CAR-T技术的优势在于重新编程的工程化T细胞可以在患者中增殖并持续存在(“活的药物”)。

通常，CAR包括位于N端的单克隆抗体衍生的单链可变片段(scFv)，铰链区，跨膜结构域，若干个胞内共刺激结构域((i)CD28，(ii)CD137(4-1BB)，CD27或其他共刺激域)，以及串联的CD3-zeta激活结构域(图1)。CAR从第一代(没有共刺激域)发展到第二代(有一个共同刺激域)再到第三代CAR(有多个共刺激域)。具有多个共刺激域的CAR(即所谓的第三代CAR)可以使CAR-T细胞的细胞毒性增强，并显著改善CAR-T细胞的持续性，表现出增强的抗肿瘤活性。

目前，CAR-T疗法对于实体肿瘤的治疗还存在诸多挑战，包括：缺乏理想的治疗靶点、归巢障碍、以及免疫抑制微环境导致的CAR-T细胞持久性表现不良等。因此，本领域还需要开发新的用于实体瘤的CAR-T细胞和治疗方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种双特异性CS1-BCMA CAR-T细胞及其应用。

在本发明的第一方面，提供了一种双特异性嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体的结构如下式I所示：

L-scFv1-I-scFv2-H-TM-C-CD3ζ (I)

式中，

各“-”独立地为连接肽或肽键；

L为任选的信号肽序列；

I为柔性接头；

H为任选的铰链区；

TM为跨膜结构域；

C为共刺激信号分子；

CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列；

scFv1和scFv2两者中一个为靶向CS1的抗原结合结构域，另一个为靶向BCMA的抗原结合结构域。

在另一优选例中，所述scFv1为靶向CS1的抗原结合结构域，所述scFv2为靶向BCMA的抗原结合结构域。

在另一优选例中，所述靶向CS1的抗原结合结构域的结构如下式A或式B所示：

V_H1-V_L1 (A)；V_L1-V_H1 (B)

式中，V_H1为抗CS1抗体重链可变区；V_L1为抗CS1抗体轻链可变区；“-”为连接肽或肽键。

在另一优选例中，所述靶向CS1的抗原结合结构域的结构如式A所示。