[发明专利]一种病毒中和抗体的检测方法、系统及其应用

权利要求书

1.一种病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

获取孔板中实验组样品的显微图像，所述实验组样品为至少两种浓度的待测物与病毒颗粒分别混合后，再与宿主细胞混合后得到的样品，其中，所述病毒颗粒携带荧光标记A或者与携带荧光标记A的标记物结合，在明场和/或与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发下对所述实验组样品进行显微成像，得到所述实验组样品的显微图像；

分析所述实验组样品的显微图像，得到所述实验组样品的图像分析结果；

基于所述实验组样品的图像分析结果得到所述宿主细胞的感染程度和所述待测物的病毒中和能力；

所述检测方法还包括：

获取阳性对照组的显微图像和阴性对照组的显微图像，其中，所述阳性对照组中的样品为阳性样品宿主细胞混合后得到的样品，

分析所述阳性对照组的显微图像和所述阴性对照组的显微图像，得到图像分析结果，包括阳性对照平均荧光强度、阴性对照平均荧光强度、细胞总数、细胞感染个数中的任意一种或至少两种的组合；

所述宿主细胞的感染程度以感染率或结合抑制率表示；

所述感染率采用如下公式进行计算：

感染率＝细胞感染个数/细胞总数；

所述结合抑制率采用如下公式进行计算：

结合抑制率＝(实验组平均荧光强度-阴性对照平均荧光强度)/(阳性对照平均荧光强度-阴性对照平均荧光强度)；

所述检测方法还包括构建拟合曲线确定所述待测物的病毒中和能力；

所述拟合的方法为：以所述待测物的浓度、实验组平均荧光强度/细胞感染个数/感染率/结合抑制率为变量，得到反映病毒中和能力的剂量依赖曲线图；

基于量-效关系方程拟合得到反映病毒中和能力的剂量依赖曲线：

Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((Log IC50-X)*Hill Slope)

X表示待测物的浓度；

Y表示待测物在X浓度下，实验组平均荧光强度/细胞感染个数/感染率/结合抑制率；

Bottom表示阴性对照平均荧光强度/细胞感染个数/感染率/结合抑制率；

Top表示阳性对照平均荧光强度/细胞感染个数/感染率/结合抑制率；

中和滴度IC50表示能引起50％个体有效的待测物浓度；

Hill Slope为斜率，通过至少两组XY数据求解得到；

所述实验组样品中的宿主细胞携带荧光标记B，且所述荧光标记A与所述荧光标记B匹配的荧光激发光不同，所述检测方法还包括获取所述荧光标记B匹配的荧光激发光激发后得到的实验组样品的显微图像；

所述检测方法还包括：

针对分别在与荧光标记A匹配的荧光通道下拍摄的第一显微图像和与荧光标记B匹配的荧光通道下拍摄的第二显微图像，对所述第一显微图像和所述第二显微图像进行对比，根据对比结果确定各孔板中的细胞在所述第一显微图像和所述第二显微图像中的位置信息是否一致。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述图像分析结果包括实验组平均荧光强度、细胞总数或细胞感染个数中的任意一种或至少两种的组合。

3.一种用于执行权利要求1-2中任一项所述的病毒抗体的检测方法的系统，其特征在于，所述系统包括如下模块：

显微成像模块，用于获取孔板中样品显微图像，所述样品为待测物和/或标准样品与病毒颗粒混合孵育后，再与宿主细胞混合后得到的样品，所述病毒颗粒携带荧光标记A或者与携带荧光标记A的标记物结合，在明场和/或与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发下对所述样品进行显微成像，得到所述样品的显微图像；

分析处理模块，用于分析所述样品的显微图像，得到所述样品的图像分析结果及基于所述样品的图像分析结果确定所述待测物的病毒中和能力。

4.根据权利要求3所述的系统，其特征在于，所述系统还包括：

样品台模块，用于承载所述孔板，所述孔板有多个样品孔，用于承载至少两种类型的待测物，所述多个样品孔中同一类型的待测物至少包括两个浓度，所述显微成像模块对所述孔板上各孔中的待测样品分别进行拍摄，得到各待测样品的显微图像。