[发明专利]一种病毒中和抗体的检测方法、系统及其应用

说明书

本发明提供一种病毒中和抗体的检测方法、系统及其应用。所述检测方法包括获取孔板中实验组样品的显微图像、分析所述实验组样品的显微图像以及基于所述实验组样品的图像分析结果得到所述宿主细胞的感染程度和所述待测物的病毒中和能力的步骤。该检测方法对孔板中的荧光标记样本进行成像和分析，快速得出病毒中和抗体能力的实验数据，避免了细胞裂解或胰酶消化等过程对细胞自然状态的干扰，且该方法操作流程简单，不需要特殊的材料或耗时的维护。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及药物的开发和筛选，尤其涉及一种病毒中和抗体的检测方法、系统及其应用。

背景技术

病毒中和抗体的功能研究主要涉及病毒中和能力和抗体结合能力的研究。抗体结合能力通常采用酶联免疫法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)、生物膜干涉技术(Biolayer Interferometry，BLI)和流式细胞荧光分选技术(Fluorescenceactivated Cell Sorting，FACS)等方法研究。抗体中和能力一般通过假病毒报告基因或病毒蚀斑减少中和实验(PRNT)来评估。但以上几种方法均存在各自的弊端与局限性，难以满足快速高通量筛选的迫切要求。

其中，酶联免疫法的核心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来进行检测；该方法无法准确地评估抗体与天然构象抗原蛋白的结合，容易产生假阳性数据。生物膜干涉技术是基于干涉光谱图的位移变化来检测生物分子间的相互作用，此方法需要待检测的蛋白必须有标签才能以亲和的方式固定在传感器上。

FACS的工作原理是将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室，在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱，后者与入射的激光束垂直相交，液柱中的细胞被激光激发产生荧光；该方法可以快速、客观地检测单个细胞的多项特征，但是，其所需的仪器相对昂贵，操作复杂，维护成本高，且需要专员管理。

蚀斑减少中和实验是检测血清中和抗体的一种敏感性较高的方法，实验以使蚀斑数减少50％的血清稀释度作为其中的效价。实验使用定量的病毒与不同稀释度的等量血清混合后赶作，接种预先准备好的单层细胞，再覆盖上营养琼脂置于37℃二氧化碳培养箱培养，数天后分别统计蚀斑数，计算该血清的蚀斑中和效价。其操作原理与传统的血清中和实验大致相同；该方法实验周期长，非常依赖人工操作，自动化程度低。

因此，开发快速有效地检测抗体结合和功能的方法，将有助于评估和筛选靶向病毒的抗体。

发明内容

鉴于现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种病毒中和抗体的检测方法、系统及其应用。所述高通量测定病毒中和抗体试验的方法检测速度快，通量高，对于靶向病毒抗体的评估和筛选具有积极的影响。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种病毒中和抗体的检测方法，具体包括如下步骤：

获取孔板中实验组样品的显微图像，所述实验组样品为至少两种浓度的待测物与病毒颗粒分别混合后，再与宿主细胞混合后得到的样品，其中，所述病毒颗粒携带荧光标记A或者与携带荧光标记A的标记物结合，在明场和/或与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发下对所述实验组样品进行显微成像，得到所述实验组样品的显微图像；

分析所述实验组样品的显微图像，得到所述实验组样品的图像分析结果；

基于所述实验组样品的图像分析结果得到所述宿主细胞的感染程度和所述待测物的病毒中和能力。