[发明专利]一种含有生殖干细胞的修复组合物及其制备方法

权利要求书

1.一种含有生殖干细胞的修复组合物，其特征在于，包括子宫内膜干细胞、β-雌二醇、淫羊藿苷、生理盐水；

所述人子宫内膜干细胞的含量为2×10⁵~1×10⁶个/mL；

所述β-雌二醇的含量为0.3~0.8mg/ml；

所述淫羊藿苷的含量为0.3~0.8mg/ml。

2.根据权利要求1所述的含有生殖干细胞的修复组合物，其特征在于，所述子宫内膜干细胞的含量为4×10⁵个/mL。

3.根据权利要求1所述的含有生殖干细胞的修复组合物，其特征在于，所述β-雌二醇的含量为0.6mg/ml。

4.根据权利要求1所述的含有生殖干细胞的修复组合物，其特征在于，所述淫羊藿苷的含量为0.5mg/ml。

5.根据权利要求1所述的含有生殖干细胞的修复组合物，其特征在于，所述子宫内膜干细胞的制备方法为：

S1、采集经血，向10~20重量份经血中加入20~50重量份的PBS缓冲液，再加入10~20重量份的分离液，第一次离心，取中间层，加入0.2~0.6重量份Ⅰ型胶原酶，混合均匀，第二次离心，弃上清，得到细胞沉淀；

S2、将细胞沉淀用生理盐水配制成2× 10⁴~1× 10⁵个/ml的浓度，并接种于原代培养基，在33~37℃、体积分数为4.8~5.2%CO₂的培养箱中培养10~24h，得到P0代细胞；

S3、将P0代细胞用生理盐水配制成2× 10⁴~1× 10⁵个/ml的浓度，接种于传代培养基，在33~37℃、体积分数为4.8~5.2%CO₂的培养箱中培养至细胞融合度大于85%，收集细胞，重复至P5代；即得子宫内膜干细胞。

6.根据权利要求5所述的含有生殖干细胞的修复组合物，其特征在于，所述分离液为淋巴细胞分离液。

7.根据权利要求5所述的含有生殖干细胞的修复组合物，其特征在于，所述原代培养基包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为MEM培养基，所述添加物包括5~10mM/ml D-葡萄糖、0.5~1mg/mlβ-甘油磷酸钠、5~12mg/ml海藻糖、0.8~1.5 mg/ml维生素C、2~5ng/ml地塞米松、3~6ng/ml干细胞生长因子。

8.根据权利要求5所述的含有生殖干细胞的修复组合物，其特征在于，所述传达培养基包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为MEM培养基，所述添加物包括5~10mM/ml D-葡萄糖、0.5~1mg/mlβ-甘油磷酸钠、0.8~1.5 mg/ml 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、5~12mg/ml海藻糖、0.8~1.5 mg/ml维生素C、2~5ng/ml地塞米松、3~6ng/ml干细胞生长因子。

9.根据权利要求5所述的含有生殖干细胞的修复组合物，其特征在于，所述传达培养基包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为MEM培养基，所述添加物包括9mM/ml D-葡萄糖、0.8mg/mlβ-甘油磷酸钠、1.2mg/ml 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、8mg/ml海藻糖、1 mg/ml维生素C、4ng/ml地塞米松、5ng/ml干细胞生长因子。

10.根据权利要求1~9任一所述的含有生殖干细胞的修复组合物的制备方法，其特征在于，将β-雌二醇、淫羊藿苷、生理盐水混合均匀，重悬子宫内膜干细胞，即得含有生殖干细胞的修复组合物。