[发明专利]一种定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法

权利要求书

1.一种定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1标准工作液配制：

a、分别精密称取4种抗结核药物标准品，分别用溶剂溶解后并稀释至标准工作液；分别量取相同体积的所述4种抗结核药物的标准工作液并混合，配置得到混合标准液；取所述混合标准液，用甲醇-水溶液稀释至不同浓度的标准曲线系列工作液和不同浓度的质控系列工作液；

b、分别精密称取内标标准品，并用甲醇溶解稀释至内标工作液的浓度；分别量取所述内标工作液并混合，配制得到混合内标液；

S2样品制备：

a、标准曲线样品制备：以空白血浆作为空白基质，加入所述标准曲线系列工作液，涡旋混匀，配置不同浓度的标准曲线样品；

b、质控样品制备：以空白血浆作为空白基质，加入所述质控系列工作液，涡旋混匀，配制不同浓度的质控样品；

S3样品处理：往100μL目标样品中加入800μL所述混合内标液，震荡提取5min，15000r/min离心10min，吸取50μL上清液用450μL流动相混合液稀释，得到待测目标样品；

S4样品检测：取步骤S3的待测目标样品2μL进行高效液相色谱串联质谱检测；

S5标准曲线制作和定量分析：分别以4种所述抗结核药物标准品与各自内标的峰面积的比值为纵坐标，以4种所述抗结核药物标准品各自在血浆样本中的已知浓度为横坐标，采用加权最小二乘法进行线性回归，分别得到4种所述抗结核药物标准品的标准曲线方程，再通过标准曲线定量所述待测目标样品。

2.根据权利要求1所述的定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法，其特征在于，步骤S1中，所述4种抗结核药物标准品分别为利福平、异烟肼、吡嗪酰胺以及乙胺丁醇。

3.根据权利要求2所述的定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法，其特征在于，所述溶剂为甲醇或甲醇-水溶液；所述异烟肼对应的内标是异烟肼-d4，所述利福平和所述吡嗪酰胺对应的内标是吡嗪酰胺-15Nd3，所述乙胺丁醇对应的内标是乙胺丁醇-d4。

4.根据权利要求3所述的定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法，其特征在于，所述混合内标液中，所述异烟肼-d4的浓度为33.33ng/mL，所述吡嗪酰胺-15Nd3的浓度为333.33ng/mL，所述乙胺丁醇-d4的浓度为200.00ng/mL。

5.根据权利要求4所述的定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法，其特征在于，步骤S2中，所述标准曲线样品中，所述异烟肼的浓度分别为48.03ng/mL、96.06ng/mL、192.13ng/mL、384.26ng/mL、1152.78ng/mL、3458.33ng/mL、10375.00ng/mL以及31125.00ng/mL；所述利福平的浓度分别为49.15ng/mL、98.30ng/mL、196.60ng/mL、393.21ng/mL、1179.63ng/mL、3538.89ng/mL、10616.67ng/mL以及31850.00ng/mL；所述吡嗪酰胺的浓度分别为62.19ng/mL、124.38ng/mL、248.77ng/mL、497.53ng/mL、1492.59ng/mL、4477.78ng/mL、13433.33ng/mL以及40300.00ng/mL；所述乙胺丁醇的浓度分别为17.67ng/mL、35.34ng/mL、70.68ng/mL、141.36ng/mL、424.07ng/mL、1272.22ng/mL、3816.67ng/mL以及11450.00ng/mL。

6.根据权利要求5所述的定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法，其特征在于，步骤S2中，所述质控样品中，所述异烟肼的浓度分别为100ng/mL、1000ng/mL及25000ng/mL；所述利福平的浓度分别为101.76ng/mL、1017.6ng/mL及25440ng/mL；所述吡嗪酰胺的浓度分别为128.96ng/mL、1289.6ng/mL及32240ng/mL；所述乙胺丁醇的浓度分别为36.76ng/mL、367.6ng/mL及9190ng/mL。