[发明专利]一种定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法

说明书

本发明公开了一种定量分析抗结核药血浆浓度的LC‑MS/MS方法，该方法通过S1标准工作液配制、S2样品制备、S3样品处理、S4样品检测及S5标准曲线制作和定量分析，可同时对异烟肼、利福平、吡嗪酰胺及乙胺丁醇进行检测，样品前处理过程简单易操作，所用试剂均为常规试剂，成本较低。以反相150mm×2.1mm的C18柱、控制流速为0.3mL/min、柱温为30℃，可以很好地解决异烟肼、利福平、吡嗪酰胺以及乙胺丁醇的极性差异大的问题，分离效果较好，且成本较低。本申请具有较高的灵敏度、准确度与精密度，检测线性范围宽，检测时间短，可作为一种可靠的宜推广的检测方法用于临床一线抗结核病药物的治疗浓度监测。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，特别涉及一种定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法。

背景技术

结核病是患者感染结核分枝杆菌后引起的传染性疾病，目前临床上的治疗方案是通过多种抗结核药物长期联合应用，其中利福平(Rifampicin，RFP)、异烟肼(Isoniazid，INH)、吡嗪酰胺(Pyrazinamide，PZA)和乙胺丁醇(Ethambutol，EMB)属于一线抗结核药物。由于结核病患者通常合并其他的病症，同时使用多种药物，加之病人个体的差异，造成抗结核药物在人体内的浓度有很大的差异。体内药物浓度过低，则达不到治疗效果；体内药物浓度过高又会引起毒副反应。因此，监测结核病患者体内抗结核药物浓度对于保证治疗效果、减少耐药性及毒副反应具有重要意义。

目前国内外针对抗结核药血浆浓度检测的方法主要有液相色谱法、液相-串联质谱法(LC-MS/MS)及超高效液相-串联质谱法(UPLC-MS/MS)，这些方法中，有的是仅检测一种抗结核药物，检测时间长，检测成分单一，在联合用药时不太适用。有些方法是同时检测多种抗结核药物，甚至有专利报道同时检测11种抗结核药物，但同时检测这些药物的方法，大多使用UPLC-MS/MS法，需要用到UPLC液相色谱仪及UPLC柱，检测成本较大，不适宜推广。

发明内容

本发明的目的在于克服目前存在的技术缺陷，提供一种定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS(液相-串联质谱)方法。该方法可以同时对人血浆中四种一线抗结核药(包括利福平、异烟肼、吡嗪酰胺、乙胺丁醇)进行定量检测，检测快速，前处理过程简单易行，检测灵敏度高，定量精确，并且可以广泛适用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种定量分析抗结核药血浆浓度的LC-MS/MS方法，包括如下步骤：

S1标准工作液配制：

a、分别精密称取4种抗结核药物标准品，分别用溶剂溶解后并稀释至标准工作液；分别量取相同体积的所述4种抗结核药物的标准工作液并混合，配置得到混合标准液；取所述混合标准液，用甲醇-水溶液稀释至不同浓度的标准曲线系列工作液和不同浓度的质控系列工作液；

b、分别精密称取内标标准品，并用甲醇溶解稀释至内标工作液的浓度；分别量取所述内标工作液并混合，配制得到混合内标液；

S2样品制备：

a、标准曲线样品制备：以空白血浆作为空白基质，加入所述标准曲线系列工作液，涡旋混匀，配置不同浓度的标准曲线样品；

b、质控样品制备：以空白血浆作为空白基质，加入所述质控系列工作液，涡旋混匀，配制不同浓度的质控样品；

S3样品处理：往100μL目标样品中加入800μL所述混合内标液，震荡提取5min，15000r/min离心10min，吸取50μL上清液用450μL流动相混合液稀释，得到待测目标样品；

S4样品检测：取步骤S3的待测目标样品2μL进行高效液相色谱串联质谱检测；