[发明专利]一种三联灭活疫苗及其制备和应用

说明书

本发明涉及水产疫苗学领域，具体的说是一种哈氏弧菌、鳗弧菌、迟缓爱德华氏菌三联灭活疫苗及其制备和应用。三联灭活疫苗含灭活后的哈氏弧菌T4、鳗弧菌C312、迟缓爱德华氏菌TX1。所得灭活疫苗对哈氏弧菌、鳗弧菌、迟缓爱德华氏菌感染的最高相对免疫保护力(RPS)可分别达到89.29％、85.71％和76.67％，免疫后6个月RPS仍能够达到50％左右。本发明所得的疫苗制备过程简单、造价低廉、无安全隐患、免疫效果好，一次免疫接种即可防控三种不同种病原感染。

技术领域

本发明涉及水产疫苗学领域，具体的说是一种哈氏弧菌、鳗弧菌、迟缓爱德华氏菌三联灭活疫苗及其制备和应用。

背景技术

我国是全球第一水产养殖大国，但是随着工厂化养殖规模的扩大，水产病害频发发生，严重制约着水产养殖业的发展。目前，我国海水养殖病害控制手段仍以施用抗生素和消毒药剂为主，其所造成的药物残留导致食品安全隐患、抗药性微生物增加和生态环境污染等问题。因此，抗生素和消毒药剂的水产应用已在世界各国受到限制。疫苗，尤其是灭活疫苗，是一种国际上公认的绿色无公害病害防御方法，也是抗生素的理想替代品之一，较之于抗生素，疫苗免疫具有安全、长效、环境友好等特点。利用疫苗对海水养殖鱼类流行性病害进行免疫防治，在欧美等国家已取得了成功，获得了显著的经济效益。虽然近年我国已有水产鱼用疫苗获得新兽药证书报道，但是这些疫苗主要是针对一种病原的单价疫苗，保护效应有局限性。海水养殖生物病原具多样性等特点，在这种情况下，理想的疫苗不是单价疫苗，而是对多种不同种/型病原感染皆有保护效应的交叉保护疫苗。同时，我国鱼类养殖产业规模巨大，抗病疫苗研发和应用具有很大的潜力和市场应用价值。

迟缓爱德华氏菌、鳗弧菌和哈氏弧菌是我国水产养殖鱼类的重要病原菌，其宿主范围广，危害大、死亡率高，严重影响着我国的水产养殖业健康发展。迟缓爱德华氏菌宿主范围很广，养殖牙鲆、大菱鲆、鲻鱼、鲷鱼、牙鮃、鰤鱼等均可被感染，淡水养殖的鳗鲡、斑点叉尾鮰、罗非鱼等也能被感染。鳗弧菌可感染鲑鱼、虹鳟、鳗鲡、香鱼、鲈鱼、鳕鱼、大菱鲆、牙鲆、黄鱼等，当水产养殖动物在不良的环境条件下，遭遇不利刺激或是受伤时，会诱发疾病的产生。哈氏弧菌可感染大菱鲆，青石斑鱼，斜带石斑鱼，鲈鱼，大黄鱼、半滑舌鳎等。目前，针对上述三种病原菌的的防控仍然以抗生素和化学药物为主，因此，开发低成本高效的多联疫苗对上述三种病原菌所引起的疾病进行免疫防治，对于摆脱对抗生素与消毒药的依赖，保障水产品安全有重要意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种哈氏弧菌、鳗弧菌、迟缓爱德华氏菌三联灭活疫苗及其制备和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种三联灭活疫苗，三联灭活疫苗含灭活后的哈氏弧菌T4、鳗弧菌C312、迟缓爱德华氏菌TX1。

所述三联灭活疫苗中哈氏弧菌T4悬液、鳗弧菌C312悬液、迟缓爱德华氏菌TX1悬液按体积比为1:1:1混合。

所述三联灭活疫苗中哈氏弧菌悬液浓度为2.0×10¹⁰CFU/ml，鳗弧菌悬液浓度为2.0×10¹⁰CFU/ml，迟缓爱德华氏菌悬液浓度为4.0×10¹⁰CFU/ml。

所述三联灭活疫苗中三种菌悬液与佐剂的体积比例为3:7。

一种所述的三联灭活疫苗的制备方法，哈氏弧菌T4、鳗弧菌C312、迟缓爱德华氏菌TX1分别灭菌，灭菌后重悬，重悬液按体积比为1:1:1混合，混合后与佐剂混合，即为三联灭活疫苗。

所述哈氏弧菌悬液浓度为2.0×10¹⁰CFU/ml，鳗弧菌悬液浓度为2.0×10¹⁰ CFU/ml，迟缓爱德华氏菌悬液浓度为4.0×10¹⁰CFU/ml。