[发明专利]一种基于crispr-cas12f1检测病原微生物RNA的方法

权利要求书

1.一种基于cas12f1酶检测病原微生物RNA的方法，其特征在于：病原微生物RNA提取后，通过RT-PCR扩增技术获得带有含T7启动子的短的双链DNA，然后T7 RNA转录获得最终底物RNA。

2.以RNA为靶向底物引起cas12f1酶反式切割单链DNA探针的能力，通过探针荧光信号强度的变化进而获得高特异性与高灵敏度的检测。

3.按权利要求1所述的一种cas12f1检测病原微生物的方法，其特征在于：病原微生物RNA，包括伤寒沙门菌(E.typhi)，肺炎克雷伯菌(K.pneumonia)，铜绿假单胞菌(K.pneumonia)和大肠杆菌(E.coli)。

4.按权利要求1所述的一种cas12f1检测病原微生物的方法，其特征在于：设计病原微生物RNA特异性引物，其正向引物5’端需加上T7启动子序列(taatacgactcactatagg)。

5.按权利要求3所述引物设计，其特征在于：大肠杆菌Forward 引物(taatacgactcactataggGGAGGAAGGGAGTAAAGTTAAT)，Reverse引物(GGAGTTAGCCGGTGCTTCT)；肺炎克雷伯Forward 引物(taatacgactcactataggGGAGGAAGGCGGTGAGGT)， Reverse引物(ACGGAGTTAGCCGGTGCTTCT)；铜绿假单胞菌 Forward 引物(taatacgactcactataggGGAGGAAGGGCAGTAAGTT)， Reverse引物(ACGAAGTTAGCCGGTGCTTA)；伤寒沙门菌Forward 引物(taatacgactcactataggGGAGGAAGGTGTTGTGGTTA)，Reverse引物(GAGTTAGCCGGTGCTTCTTC)。

6.按权利要求1所述RT-PCR扩增后，RNA转录，其特征在于：大肠杆菌扩增后转录的序列为GGAGGAAGGGAGUAAAGUUAAUACCUUUGCUCAUUGACGUUACCCGCAGAAGAAGCACCGGCUAACUCC(划线部分为检测靶点区域，阴影部分为检测错配区域)。

7.按权利要求1所述RT-PCR扩增后，RNA转录，其特征在于：肺炎克雷伯扩增后转录的序列为GGAGGAAGGCGGUGAGGUUAAUAACCUCAUCGAUUGACGUUACCCGCAGAAGAAGCACCGGCUAACUCCGU(划线部分为检测靶点区域，阴影部分为检测错配区域)。

8.按权利要求1所述RT-PCR扩增后，RNA转录，其特征在于：铜绿假单胞菌扩增后转录的序列为GGAGGAAGGGCAGUAAGUUAAUACCUUGCUGUUUUGACGUUACCAACAGAAUAAGCACCGGCUAACUUCGU(划线部分为检测靶点区域，阴影部分为检测错配区域)

按权利要求1所述RT-PCR扩增后，RNA转录，其特征在于：伤寒沙门菌扩增后转录的序列为GGAGGAAGGUGUUGUGGUUAAUAACCGCAGCAAUUGACGUUACCCGCAGAAGAAGCACCGGCUAACUC

(划线部分为检测靶点区域)。