[发明专利]节律基因蛋白表达和RNA甲基化修饰在制备衰老检测试剂盒中的应用

权利要求书

1.检测节律基因蛋白表达的试剂和检测RNA甲基化修饰的试剂在制备衰老检测试剂盒中的应用，其特征在于：

所述衰老为氧化应激诱导的早衰；

所述衰老检测试剂盒是通过检测细胞中节律基因蛋白的表达量和RNA甲基化修饰水平判断细胞衰老；

所述节律基因为ADCY9；所述RNA甲基化为ADCY9 的m⁶A RNA甲基化；

当检测到细胞中ADCY9蛋白低表达，表明细胞进入衰老状态；

当检测到进入衰老状态的细胞中所述ADCY9 的m⁶A RNA甲基化含量降低，表明细胞早衰；

所述细胞为人胚肺成纤维细胞。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

所述蛋白的表达量采用相对定量分析法统计，通过蛋白条带的灰度分析，获得不同细胞表达条带的灰度值，以22PDL年轻细胞组为对照，设为1，其他细胞表达水平与22PDL年轻细胞组灰度值相比较；蛋白和内参表达量通过Western blot检测获得；

所述RNA甲基化修饰的水平采用免疫共沉淀联合测序分析检测得到，以22PDL年轻细胞组为对照；

所述22PDL年轻细胞组的定义为：继代培养细胞最终的群体倍增水平PDL为22的细胞，群体倍增水平PDL的计算公式为n=3.32*(logN2-logN1)+X，其中N2为该代细胞收获的细胞总数，N1为上代接种的细胞数，X为上代细胞的群体倍增水平PDL。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

所述的检测节律基因蛋白表达的试剂为Western blot半定量检测试剂；

所述的检测RNA甲基化修饰的试剂为RNA甲基化免疫共沉淀检测试剂。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

所述应用包括取待测细胞，提取细胞总蛋白，采用衰老检测试剂盒进行蛋白半定量，以及提取待测细胞总RNA，采用衰老检测试剂盒进行m⁶A RNA甲基化水平检测。