[发明专利]一种表征乳液分子特定成分流动性的方法

权利要求书

1.一种表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，通过荧光探针标记乳液膜上的特定成分的分子，使用激光共聚焦显微镜的荧光光漂白恢复技术，测定所述乳液膜上的单个分子的迁移情况用以表征流动性；所述特定成分为能够被荧光探针所标记的成分，包括脂质和蛋白，所述脂质包括甘油三酯、鞘磷脂、聚乙二醇磷，所述蛋白包括水溶性蛋白、酶；

所述乳液为乳状液分散体系，包括天然乳、食品加工工艺产生的乳、皮克林乳液、微乳液和纳米乳化液，所述天然乳包括人乳和其他非人乳，当所述乳液为人乳时，所述方法用以计算出新月区的存在概率；

利用荧光探针技术标记乳液中特定成分的具体方法为：乳液与荧光探针混合，避光染色30min以上，取样本放置于载玻片上，盖上盖玻片；

所述载玻片在放置样品前进行预处理，制成网格化处理过的以赖氨酸为基底的网格状赖氨酸玻片，用于将单个乳液分子进行固定；所述网格状赖氨酸玻片的制备方法为：将包含若干个0.5mm*0.5mm单格的5mm*5mm网格置于经高压灭菌处理后的玻片上，滴加多聚赖氨酸，4℃过夜包被；再经冲洗、干燥后，即得所述网格状赖氨酸玻片。

2.根据权利要求1所述的表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，所述乳液的粒径为0.5～100μm。

3.根据权利要求1所述的表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，所述流动性包括荧光恢复到最后稳定值的1/2时的时间值t_1-half、动态分子比例F1和扩散系数K，其中，t_1-half代表荧光恢复速率的快慢，F1代表所测乳液中特定成分的动态分子比例，K代表所测乳液中分子扩散程度的物理量。

4.根据权利要求1所述的表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，所述荧光探针包括0.1mg/mL Nile Red、1mg/mL Rh-DOPE、0.1mg/mL Nile Blue、1mg/mL NBD-PC、0.5mg/mL NBD-SM，所述乳液与所述荧光探针对应按照5:1、40:1、50:1、40:1、5:1(v/v)混合。

5.根据权利要求4所述的表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，当所述乳液为人乳时，所述荧光探针为0.5mg/mL NBD-SM，所述乳液与所述荧光探针对应按照5:1(v/v)混合。

6.根据权利要求4所述的表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，所述NileRed、NBD-SM与NBD-PC荧光探针均由Ar⁺激光器激发，其中，Nile Red荧光探针激发波长为514nm，NBD-SM与NBD-PC荧光探针激发波长均为488nm；所述Nile Blue与Rh-DOPE荧光探针由He-Ne激光器激发，激发波长分别为633nm、543nm。

7.根据权利要求6所述的表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，当所述乳液为人乳时，所述NBD-SM荧光探针由Ar⁺激光器激发，激发波长为488nm。

8.根据权利要求1所述的表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，所述激光共聚焦显微镜用×63油镜进行观测，扫描范围是512*512nm，发射光接收范围为490～800nm，针孔为90～160AU，增益值为700～950。

9.根据权利要求8所述的表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，当所述乳液为人乳时，所述激光共聚焦显微镜用×63油镜进行观测，扫描范围是512*512nm，发射光接收范围为521-635nm，针孔为155.4AU，增益值为909。

10.根据权利要求1所述的表征乳液特定成分流动性的方法，其特征在于，漂白区域直径为5/1.25或10/2.5或15/3.75pixel/μm，漂白时间为3～800s，扫描次数为3～500次，激光线衰减器传输比例为0.01％～2％。