[发明专利]一种表征乳液分子特定成分流动性的方法

说明书

本发明公开了一种表征乳液特定成分流动性的方法，首先制备具有网格状的赖氨酸玻片，可将单个乳液分子与荧光探针混合后进行固定，然后再使用激光共聚焦显微镜采集待测乳液特定成分经漂白后荧光恢复的图像及数据；通过计算出的荧光恢复到最后稳定值的1/2时的时间值(t_1‑half)、扩散系数(K)以及动态分子的比例(F1 mobile fraction)比较分析不同特定成分的流动性。本发明采用了激光共聚焦显微镜与荧光探针的结合，与传统方法相比，方便统计和计数视野内的乳状液分子；能够更直观地表征乳状液特定成分的流动性；新增乳状液分子精准流动性的评价指标，提出了在探索研究油水界面上乳化性质的新方法。

技术领域

本发明属于食品分析技术领域，具体涉及一种表征乳液特定成分流动性的方法。

背景技术

乳状液是指一种液体以液珠形式分散在与它不相混溶的另一种液体中而形成的分散体系。乳状液一般不透明，呈乳白色。液滴直径大多在100nm～10μm之间，可用一般光学显微镜观察。乳状液可分水包油和油包水两种类型。食品乳状液的稳定性决定了食品的结构、口感和稳定性，乳化体系的生成规律和稳定机理是乳状液稳定性研究中关键难点。在食品领域中，常见的乳状液体系有天然乳，皮克林乳液，微乳液和纳米乳化液等纳米颗粒输送系统等均属此种分散体系。在食品分析检测领域中，乳状液的流动性主要是通过物理方法进行测定的，包括粘度计、荧光分度计、流变仪的使用，通过测定黏度随剪切速度的变化表征其流变学的性质，但是这些物理方法并不够直观表征乳状液单个单子分子特定成分的流动性。

荧光光漂白恢复(fluorescence recovery after photobleaching，FRAP)也称作光脱色荧光恢复技术或光漂白荧光恢复技术，是一种可用于监测细胞膜或人工双层中蛋白质和脂质的差异融合移动性的技术。它的原理主要是利用高能激光照射细胞的某一特定区域，使该区域内标记的荧光分子不可逆的淬灭，这一区域称荧光漂白区，随后，由于细胞质中的脂质分子或蛋白质分子的运动，周围非漂白区荧光分子不断向光漂白区迁移，使得荧光漂白区的荧光强度逐渐地回复到原有水平。荧光光漂白恢复能够直接表征被标记成分的流动性，同时也能测量膜蛋白扩散的速率。

另外，对于乳状液特定成分流动性的表征方法尚未见有相关公开报道，因此，这块空白区域亟需填补。

发明内容

鉴于上述现有表征乳液中特定成分流动性的方法中存在的问题，本发明的目的是提供一种直观表征乳液中特定成分流动性的方法，该方法具有反映直观、操作简单、快速比较等特点。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种表征乳液特定成分流动性的方法，通过荧光探针技术标记乳液膜上的特定成分的分子，使用激光共聚焦显微镜的荧光光漂白恢复技术，测定所述乳液膜上的单个分子的迁移情况用以表征流动性；所述特定成分为能够被荧光探针所标记的成分，包括脂质和蛋白。

进一步的，所述乳液为常见的乳状液分散体系，包括天然乳、食品加工工艺产生的乳、皮克林乳液、微乳液和纳米乳化液等均属此种分散体系。

进一步的，乳状液的单个分子主要包括蛋白和脂质，其中脂质包括甘油三酯、鞘磷脂、聚乙二醇磷等，蛋白包括水溶性蛋白、酶等。

作为本发明所述的一种表征乳液特定成分流动性的方法的一种优选方案，其中：将样品经前处理固定包括，使用前，将玻片超纯水浸泡2h，浸酸过夜，超纯水冲洗干净，95％乙醇浸泡12h，70℃烤干，高压处理，然后将包含若干个0.5mm*0.5mm单格的5mm*5mm网格放置玻片中心处，滴加多聚赖氨酸(0.025mg/ml)，4℃过夜包被。使用前，使用超纯水冲洗，无水乙醇冲洗，超净台风干。制备样品时，将2μL样品均匀滴加在网格区域内进行固定。

进一步的，荧光光漂白和恢复曲线由三个参数表征，因此，所述乳液膜上的单个分子的迁移情况主要采用以下三个参数表征分子的流动性：