[发明专利]一种新型类囊泡溶瘤病毒及其在制备抗肿瘤药物上的应用

权利要求书

1.一种新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L，其特征为：所述新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L为能表达可溶性蛋白PVRCD137L的腺病毒的外面包裹了类囊泡，而且所述的类囊泡的膜上有VSV-G蛋白；所述VSV-G蛋白的DNA序列如SEQ ID NO:19所述，所述VSV-G蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所述；所述可溶性蛋白PVRCD137L的DNA序列如SEQ IDNO:6所述，所述可溶性的PVRCD137L的蛋白序列如SEQ ID NO:1所述。

2.如权利要求1所述的一种新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L，其特征为：所述VSV-G蛋白，能够实现肿瘤细胞的靶向；而且由于类囊泡纳米囊泡的存在，所述新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L能够不被抗腺病毒的中和抗体所作用，具有显著延长的给药窗口期；所述新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L能够更加持续的表达可溶性的PVRCD137L、去持续阻断PVR/TIGIT免疫检测点通路、活化CD137免疫共刺激通路。

3.如权利要求1所述的一种新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L，其特征为通过以下方法制备获得：

(1)制备细胞外膜上镶嵌VSV-G蛋白的细胞，我们将此细胞命名为VSV-G细胞；

(2)腺病毒Ad5sPVRCD137L感染VSV-G细胞，所述腺病毒Ad5sPVRCD137L是能表达可溶性的PVRCD137L的腺病毒；

(3)使用培养基、PBS或者其他缓冲液重悬收集的感染腺病毒之后的VSV-G细胞，将细胞悬液利用离心挤压剪切的方法挤压细胞剪切通过孔径为10μm、5μm、1μm的膜滤纸；

(4)收集离心挤压剪切后的病毒悬液，通过密度梯度离心的方法富集和收集类囊泡包裹的新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L，所述的新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-GAd5sPVRCD137L由类囊泡包裹，而且包裹的类囊泡膜上有VSV-G蛋白，能够实现靶向。

4.如权利要求1所述的一种新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L在制备抗肿瘤药物中的应用，这些肿瘤包括但不限于肝癌、肾癌、白血病、肺癌、黑色素瘤和结直肠癌等肿瘤。

5.如权利要求1所述的一种新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用，这些肿瘤包括但不限于肝癌、肾癌、白血病、肺癌、黑色素瘤和结直肠癌等肿瘤。

6.如权利要求1所述的一种新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L在制备肿瘤阻断PVR/TIGIT免疫检测点通路与活化CD137通路药物中的应用，这些肿瘤包括但不限于肝癌、肾癌、白血病、肺癌、黑色素瘤和结直肠癌等肿瘤，新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-GAd5sPVRCD137L可以感染肿瘤细胞并复制和表达可溶性的PVRCD137L，所表达的PVRCD137L与TIGIT结合从而阻断PVR/TIGIT免疫检测点通路，所表达的PVRCD137L与CD137结合从而活化CD137免疫共刺激通路。