[发明专利]一种新型类囊泡溶瘤病毒及其在制备抗肿瘤药物上的应用

说明书

本发明涉及肿瘤治疗领域，具体涉及一种新型类囊泡溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明公开了：病毒Ad5sPVRCD137L感染能表达特定膜蛋白VSV‑G的细胞，然后利用离心挤压/剪切的方法将这些细胞通过膜孔从而形成囊泡，制造由类囊泡包裹的溶瘤病毒，类囊泡的外表面在制备过程中保留了细胞表面的膜蛋白VSV‑G。所制备的新型类囊泡溶瘤病毒可以通过膜蛋白VSV‑G实现重靶向，增加病毒的基因转导效率，而且能逃避抗病毒抗体的中和作用，还能提高病毒产量，病毒所表达的可溶性融合蛋白sPVRCD137L可以发挥阻断免疫检测点和活化免疫共刺激的双重功能。该新型类囊泡溶瘤病毒能显著活化抗肿瘤免疫并最终显著延长小鼠生存。

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗领域，尤其是肿瘤免疫治疗领域，具体涉及一种新型类囊泡溶瘤病毒EM/VSV-G Ad5sPVRCD137L在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一，每年都有数百万的人死于癌症。许多数病人在诊断时已经处于中晚期从而失去外科手术治疗的机会，传统的放疗化疗，并没有给肿瘤带来突破性的进展，即使小分子靶向药物，也面临着短期内复发的巨大挑战。

近十年来，抗肿瘤免疫治疗临床研究不断出现的令人振奋的结果，给肿瘤患者重新带来了希望。同时阻断免疫负性调控和激活共刺激通路是被证明为有效的治疗肿瘤的方法，至今已有多个免疫检查点阻断剂被批准为用于临床肿瘤治疗的药物。TIGIT(T cellimmunoglobulin and immunoreceptor tyrosinebased inhibitory motif[ITIM]domain)是近年来发现的另外一个表达在淋巴细胞上的免疫检查点调控分子，参与对活化的T细胞及NK细胞的负性调控。阻断TIGIT从而恢复CD226的免疫共刺激通路，是一个巧妙而且有效的抗肿瘤免疫策略。

如何在肿瘤局部有效诱导I型干扰素介导的免疫活化、增强肿瘤微环境免疫细胞的浸润，可以使肿瘤对靶向免疫检查点的治疗更加敏感，这也许是解决免疫检查点治疗普适性(有效率)不高的有效手段之一。然而，如何解决免疫检查点治疗“脱靶”效应这一问题呢？

病毒作为外来侵入颗粒，能够有效激活机体的天然免疫和适应性免疫。随着溶瘤病毒T-Vec在2015年底被FDA批准上市，溶瘤病毒介导的抗肿瘤免疫治疗受到越来越多的关注。溶瘤病毒免疫疗法是否可以使肿瘤对靶向免疫检查点的治疗更加敏感，从而解决免疫检查点治疗普适性(有效率)不高这一问题(免疫检查点治疗遇到的第1个问题)。

另外，得益于溶瘤病毒在肿瘤细胞具有选择性复制的优势，利用表达免疫检查点阻断剂的溶瘤腺病毒在肿瘤局部复制的同时，使得免疫活化最大限度被局限在肿瘤的局部微环境，有效避免阻断免疫检查点“脱靶”而造成其它正常组织的“误伤”(免疫检查点治疗遇到的第2个问题)。

目前，缺乏一种同时具有阻断免疫检查点和激活免疫共刺激通路的复制型溶瘤腺病毒。

另外，虽然溶瘤腺病毒在肿瘤局部表达肿瘤免疫治疗蛋白的策略有巨大的优势，然而腺病毒的native tropism限制了溶瘤腺病毒的应用。Ad5通过病毒的fiber knob与靶细胞膜上的CAR(the coxsackie and adenovirus receptor)结合进入细胞。大量研究表明，Ad5对细胞表面低表达CAR的肿瘤感染效率差，这也限制了溶瘤腺病毒Ad5介导的肿瘤基因治疗的临床疗效，又由于大部分肿瘤细胞低表达CAR，因此开发增强腺病毒对CAR低表达肿瘤细胞感染效率的方法至关重要。除此之外，人体中广泛存在的腺病毒中和抗体也是限制腺病毒疗法临床疗效的重要因素。