[发明专利]一种用于花椰菜杂交种子纯度鉴定的SSR引物及方法

权利要求书

1.SSR引物在鉴定“津品56”花椰菜杂交种子纯度中的应用，其特征在于：所述SSR引物分别为BoSSR01和/或BoSSR02；所述SSR引物序列如下：

。

2.一种“津品56”花椰菜杂交种子纯度鉴定的方法，其特征在于：包含以下步骤：

(1)提取花椰菜父母本和杂交种子的DNA；

(2)以花椰菜基因组DNA为模板，使用权利要求1中所述的SSR引物进行PCR扩增反应；

(3)对扩增产物进行毛细管凝胶电泳检测；

(4)对电泳检测结果数据进行分析，同时具有父母本共显性特征条带的杂交种子鉴定为真正的杂交种，缺少父本或母本任意一个特征带的均记为假杂种，并计算种子纯度。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中提取花椰菜父母本和杂交种子的DNA的方法为CTAB法。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中PCR扩增反应具体使用的是10μL反应体系：10×buffer 1.0μL，25mM MgCL₂1.0μL，2mM dNTPs 1.0μL，10μM正向引物与反向引物各1.0μL，0.5单位的Taq DNA聚合酶0.2μL，模板50ng，加ddH₂O至10μL；扩增程序为：95℃3min，95℃15s、58℃15s、72℃30s循环35次，72℃7min。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中PCR扩增反应使用的96孔PCR板在扩增前只在1～95孔中加入扩增反应体系，最后H12孔不加任何试剂。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：1～95孔中加入的扩增反应体系为10μLPCR产物与1×15μL TE缓冲液的混合液；PCR反应结束后H12孔加入25μL DNALadder。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述电泳检测的进样电压2.0kV，时间30s；分离电压5.0kV，时间68min。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：种子纯度的计算方法为：种子纯度＝检测到的真正杂交种个数/种子检测总数×100％。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：引物BoSSR01可扩增出172bp的母本共显性特征条带以及145bp的父本共显性特征条带；引物BoSSR02可扩增出145bp的母本共显性特征条带以及126bp的父本共显性特征条带。