[发明专利]一种用于花椰菜杂交种子纯度鉴定的SSR引物及方法

说明书

本发明公开了一种用于花椰菜杂交种子纯度鉴定的SSR引物及方法，本发明中的两对SSR引物均能产生父本特异性标记和母本特异性标记，特异性强；本发明的方法可将“津品56”花椰菜杂交种子与其它杂种以及父母本区分开来，快速检测出杂交种子的纯度；本发明的检测方法具有快速、准确、低成本、操作方便等优势，能够代替传统杂交种子纯度鉴定的方法，具有较高的商业应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种鉴定花椰菜杂交种子纯度的SSR引物及其应用。

背景技术

花椰菜(Brassica oleracea var.botrytis)是十字花科芸薹属甘蓝种中以花球为产品的一个变种，其营养丰富、味道鲜美，并且含有多种吲哚衍生物，具有一定的抗癌作用，在世界上被广泛栽培和食用。据联合国粮食与农业组织(FAO)统计，2018年，我国种植面积、年总产量分别为54.7万公顷、1073.7万吨，是世界上花椰菜种植面积最大、总产量最高的国家。我国花椰菜育种以传统方式为主，侧重杂种优势利用，而杂种优势的充分表现与种子遗传纯度有着密切的联系。因此，种子纯度是衡量花椰菜杂交种子质量的重要指标，建立准确、高效、快速的花椰菜种子纯度鉴定体系有利于花椰菜种子高效准确的质量控制，具有重要的商业价值和现实意义。

SSR(Simple sequence repeat)分子标记技术具有数量丰富，覆盖整个基因组，揭示的多态性高，以孟德尔方式遗传、呈共显性且扩增结果稳定、成本低、方法简单等特点，被广泛应用于作物遗传图谱、指纹图谱构建及种子纯度鉴定等研究中。现有技术中，已有利用SSR引物鉴定花椰菜种子纯度的报道，但全部是基于甘蓝等其它花椰菜近缘物种的基因组设计SSR引物，效率低且结果稳定性较差。至今，未见基于花椰菜基因组设计的SSR引物应用于花椰菜杂交种子纯度鉴定的报道。

另外，相比传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，近年来发展成熟的毛细管电泳检测技术，是一种准确、快速、高效的SSR分子标记检测技术，它可以分离和识别最小1bp差异的DNA片段，为SSR分子标记的基因分型提供了有效的检测手段。

传统的种子纯度鉴定方法是以播种后植株的田间形态观察为依据，其周期长、工作量大，且易受环境、季节因素影响，导致结果存在偏差。因此，开发快速、准确的种子纯度鉴定方法已成为种子科研单位和企业共同关注的课题。随着分子生物学的迅速发展，使从DNA分子水平上对品种纯度进行基因鉴定和分析成为可能。采用分子标记技术进行种子纯度鉴定是一种快速、便捷、准确、有效的方法。目前利用SSR分子标记技术鉴定花椰菜杂交种子纯度的技术还未见报道。

“津品56”由天津市农业科学院蔬菜研究所育成，为秋陆地早熟花椰菜雄性不育新品种，成熟期55天左右。株型直立紧凑，内叶叠抱护球性好，适合密植。商品性状良好，生长势强，抗病性较好；单球质量约0.84kg，每亩产量2770kg，是理想的秋陆地栽培品种，已在全国范围内连续推广7年，市场反应良好，累计种植面积达2000hm²以上。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种用于花椰菜杂交种子纯度鉴定的SSR引物，所述引物能产生父本特异性标记和母本特异性标记，特异性强。

本发明的目的之二还在于提供一种花椰菜杂交种子纯度的鉴定方法，该方法利用上述SSR引物，能快速、便捷、准确、有效的鉴定花椰菜杂交种子纯度。

为实现以上目的，采用以下技术方案：

一种用于花椰菜杂交种子纯度鉴定的SSR引物组，包括2对SSR引物，分别为BoSSR01和/或BoSSR02；所述2对SSR引物序列如表1：

表1用于花椰菜杂交种子纯度鉴定的SSR引物组

其中，所述花椰菜的品种为“津品56”。

一种花椰菜杂交种子纯度鉴定的方法，包含以下步骤：