[发明专利]一种检测OTA的核酸探针、血糖仪生物传感器、制备方法、检测方法和用途

说明书

本发明属于分析化学领域，具体是涉及到一种检测OTA的核酸探针、血糖仪生物传感器、制备方法、检测方法和用途，血糖仪生物传感器包括：检测OTA的核酸探针，通过生物素固定在磁珠表面；核酶链，序列为SEQ ID NO：2；底物链，序列为SEQ ID NO：3，其5’端修饰有生物素，通过生物素固定在磁珠表面，3’端修饰有巯基，通过巯基连接有蔗糖转化酶；其检测线性范围宽，可以实现即时检测，检测下限低，灵敏度高。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体是涉及到一种检测OTA的核酸探针、血糖仪生物传感器、制备方法、检测方法和用途。

背景技术

真菌毒素污染是一个世界性的公共安全问题，世界卫生组织(WHO)和联合国粮农组织 (FAO)把真菌毒素列为食源性疾病的三大根源之首。迄今为止全球已经确认了大约400种真菌毒素及其类似物，其中赭曲霉毒素由于其对动物和人类有严重的毒性作用而备受关注。赭曲霉毒素(ochratoxins)是由曲霉(Aspergillus)和青霉(Penicillium)等丝状菌属产生的一种次级代谢产物，广泛存在于小麦、玉米、干果、咖啡、葡萄酒和啤酒等食品和饮料中。赭曲霉毒素主要包括7种结构相似的化合物，如赭曲霉毒素A(ochratoxin A，OTA)、赭曲霉毒素B(OTB)等。其中，OTA分布广、半衰期较长、化学稳定性和热稳定性高，而且具有强烈的肾毒性、肝毒性、神经毒性、免疫毒性、致癌性、致畸性和致突变性，能够通过食物链在人体富集，严重危害人们的身体健康。因此，发展可以高灵敏检测OTA等食品中有毒有害小分子的分析方法具有重要意义。

目前检测食品中OTA的传统方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、色谱-质谱联用法、酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析法等。近年来，以核酸适体作为特异性识别分子的各种检测OTA的生物传感器得到的迅速发展。核酸适体是通过体外富集系统进化技术获得的一类单链核酸分子，制备简单，性质稳定，能够特异性结合各种目标分子如蛋白质、金属离子、小分子甚至细胞。尤其对于检测不易获得抗体的小分子、金属离子等具有独到优势。文献中也报道了一些基于核酸适体的OTA检测技术，如电化学法、化学发光法、比色法、荧光法和表面增强拉曼光谱法等。

血糖仪由于其手持式尺寸、可靠的定量、容易的操作和低廉的花费，已成为世界上应用最广泛的即时检验装置。传统的血糖仪只能用于测定血糖含量，近年来发展的利用蔗糖转化酶作为标记物将蔗糖水解转化成葡萄糖，拓宽了血糖仪的应用，为实现不同的非葡萄糖目标物的检测提供了理论基础。

OTA的检测技术中，传统的薄层色谱法操作简单，试剂便宜，但是检测灵敏度和重现性均较差，而且检测时间长，不易实现自动化，无法满足现代化检测中的快速、灵敏、可靠、方便等需求。高效液相色谱法灵敏度和准确度均较高，是实验室中最常用的标准检测方法，但是该方法需要依赖大型精密仪器，而且需要专业的实验技术人员操作，不适合应用于现场快速检测。基于免疫学原理的酶联免疫吸附法快速、灵敏、经济、准确，但存在抗体制备困难、底物干扰以及假阳性结果多的缺点。胶体金免疫层析法非常适合用于现场快速检测，但同样依赖于抗体，且存在只能定性不能准确定量的缺点。基于核酸适体的生物传感器仍然依赖于各种大型检测仪器，不适用于现场检测。而基于血糖仪的即时检验方法由于血糖仪自身的限制，其检测灵敏度还有所欠缺。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测OTA的核酸探针、血糖仪生物传感器、制备方法、检测方法和用途，其检测线性范围宽，可以实现即时检测，检测下限低，灵敏度高。

本发明的内容包括一种检测OTA的核酸探针，所述核酸探针(aptamer probe，简写为 AP，即适体探针)的序列为SEQ ID NO：1，5’端修饰有生物素，SEQ ID NO：1的序列为：

其中，下划线部分为待测目标分子OTA的适体序列，可以与目标分子OTA特异性识别并紧密结合。

其中，斜体标记序列与核酶链杂交，使核酶链在没有目标物OTA时呈活性封闭状态。