[发明专利]一种用于血清特异性Ig E筛查的试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种用于血清特异性Ig E筛查的试纸条，其特征是硝酸纤维素膜检测层上设置有一条检测线和一条质控线，检测线上包被所需的肽段及肽段组合，质控线上包被兔抗人血清蛋白，胶体金分别标记肽段和鼠抗人血清蛋白，混合后制备胶体金结合垫；

合成金标肽段为ANNEIKKV、PNACHYMKCPLVKGQQ、DANQNTKTA和CANHE，合成检测线肽段HGSEPCIIHRG、EANQNTKTA、DGLEI、VPGIDTNACHFMKCPLVKGQQ、WNVPKIAPKSEN、AKIRD、WNVPKIAPKSEN、GDNG和THGKIRD。

2.权利要求1所述用于血清特异性Ig E筛查的试纸条的制备方法，其特征是按如下步骤：

（1）肽段的制备：根据检测的对象，筛选并合成权利要求1所述的特异性Ig E的肽段，将肽段组合，分别用作金标肽段和检测线肽段；

（2）肽段溶液的制备：将合成的肽段分别溶解在0.8-1.1% NaCl溶液中，使其最终溶度为0.5-5mg/ml，得到待金标的肽段溶液和检测线肽段溶液；

（3）采用柠檬酸盐还原法制备胶体金；

（4）金标鼠抗人血清蛋白的制备：用0.1M K₂CO₃溶液调鼠抗人血清蛋白溶液的pH值至8.5，边搅拌边向其中加入步骤（3）的胶体金溶液，鼠抗人血清蛋白溶液与胶体金溶液的体积比为1-10：100，同时加入稳定剂以防止抗原与胶体金颗粒聚合沉淀，得胶体金-鼠抗人血清蛋白结合物；

（5）金标多肽的制备：用0.08-0.13M HCl溶液或0.08-0.13M K₂CO₃溶液调节步骤（2）中待金标的肽段溶液，使溶液达到其最适pH值，边搅拌边向其中加入步骤（3）的胶体金溶液，肽段溶液与胶体金溶液的体积比为1-10：100，同时加入稳定剂以防止肽段与胶体金颗粒聚合沉淀，即得胶体金-肽段结合物；对于肽段组合，则将各多肽分别标记后，再按照浓度需求混合在一起；

（6）金标鼠抗人血清蛋白、金标多肽的纯化：将步骤（4）（5）中制备的金标鼠抗人血清蛋白、金标多肽经1500r/min离心10min；收集沉淀溶于稳定剂中，使其浓度达到5-30%；然后加至层析柱上进行纯化，过滤除菌，4℃保存；

（7）胶体金结合垫的制备：用三维平面点膜喷金仪，将各金标多肽及金标鼠抗人血清蛋白按5-10：1混合后均匀的喷在玻璃纤维膜上，喷液量0.8-1.2pL/cm，37℃烘干过夜，封袋备用；

（8）检测层的制备：用三维平面点膜喷金仪，将步骤（2）中检测线肽段溶液均匀喷在检测线上，将稀释好的兔抗人血清均匀喷在硝酸纤维素膜上，得到质控线；喷液量为0.8-1.8pL/cm，37℃烘干过夜，封袋备用；

（9）试纸条的组装：将样品垫，胶体金结合垫，硝酸纤维素膜，吸水垫由一端依次粘贴在PVC底板上，得用于血清特异性Ig E筛查的试纸条。