[发明专利]一种用于血清特异性Ig E筛查的试纸条及其制备方法

说明书

一种用于血清特异性Ig E筛查的试纸条及其制备方法，硝酸纤维素膜检测层上设置有一条检测线和一条质控线，检测线上包被所需的肽段及肽段组合，质控线上包被兔抗人血清蛋白，胶体金分别标记肽段和鼠抗人血清蛋白，混合后制备胶体金结合垫。制备步骤：制备筛选获得的肽段配成溶液；采用柠檬酸盐还原法制备的胶体金，用于标记鼠抗人血清蛋白和选定的多肽，并纯化这些金标蛋白和多肽；将前述物料用于胶体金结合垫、检测层的制备，组装获得用于血清特异性Ig E筛查的试纸条。本发明以筛选出的肽段或肽段组合作为血清中特异性Ig E筛查试纸条的检测抗原及标记对象，能有效改善试纸条的性能，提高检测的稳定性和准确性。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，涉及一种用于血清特异性Ig E筛查的试纸条及其制备方法。

背景技术

过敏反应是人们对某些食物/环境等外界刺激产生的一种不良反应，在医学上属于一种变态反应，多由特异性Ig E介导。过敏的完整诊断包括临床病史、流行病学与免疫学病因、皮肤试验与过敏原特异性Ig E抗体检测试验等。

体外特异性Ig E抗体检测包括免疫印记法、放射变应原吸附诊断、荧光酶标法、酶联免疫法、免疫层析试纸条检测等。体外ImmunoCAP系统因其良好的重复性、精确性及全自动的技术，被视为体外sIg E检测方法的“金标准”，但该技术不仅需要精密的仪器，严苛的测试环境和昂贵的试剂耗材，还需要配备熟练操作的技术人员。而免疫层析试纸条检测技术具有操作简便、结果快速且稳定、不需要大型设备及成本低廉等优点，可以广泛应用于过敏原检测及血清中特异性Ig E的筛查。

已有用于筛查食物过敏特异性Ig E的试纸条大多数采用过敏原全蛋白作为检测线抗原，但蛋白质分离纯化的过程较为复杂，抗原的批间稳定性差；蛋白质容易受物理化学条件的影响而变性，存储稳定性差；全蛋白可能含有非特异性结合位点，导致出现假阳性。已有用于筛查食物过敏特异性Ig E的试纸条大多数将金标蛋白质喷洒在膜上得到胶体金结合垫，但全蛋白中各组分的等电点差异较大，胶体金标记效率不一。

发明内容

本发明的目的是提出一种用于血清特异性Ig E筛查的试纸条及其制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的。

本发明所述的一种用于血清特异性Ig E筛查的试纸条，其特征在于：硝酸纤维素膜检测层上设置有一条检测线（T线）和一条质控线（C线），检测线上包被所需的肽段及肽段组合，质控线上包被兔抗人血清蛋白，胶体金分别标记肽段和鼠抗人血清蛋白，混合后制备胶体金结合垫。

本发明所述的一种用于血清特异性Ig E筛查的试纸条的制备方法，按如下步骤。

（1）肽段的制备：根据检测的对象，筛选并合成所需特异性Ig E的3-45肽的肽段，将肽段或其组合（包括2-25种肽段）分别用作金标肽段和检测线肽段。

（2）肽段溶液的制备：将合成的肽段分别溶解在0.8-1.1％NaCl溶液中，使其最终溶度为0.5-5mg/ml，即得到待金标的肽段溶液和检测线肽段溶液。

（3）胶体金的制备：采用柠檬酸盐还原法用柠檬酸三钠还原剂将氯金酸还原制成20nm-40nm的胶体金溶液。准备一个250mL的三角角烧瓶，装入150mL的双蒸水，用恒温磁力搅拌器将溶液加热至沸腾，保持煮沸1min，弃去。加入双蒸水99mL，再加入1mL1％的四氯金酸溶液搅匀后加热至沸腾，在持续揽拌中的同时快速地加入2.25mL1％的柠檬酸三钠溶液，大约2min左右溶液的颜色变至紫红后并不再变化，再加热搅拌溶液15min。移去热源，冷却至室温，双蒸水定容至100mL，4℃保存备用。

（4）金标鼠抗人血清蛋白的制备：用0.1M K₂CO₃ 溶液调鼠抗人血清蛋白溶液的pH值至8.5，边搅拌边向其中加入步骤（3）的胶体金溶液，鼠抗人血清蛋白溶液与胶体金溶液的体积比为1-10:100，同时加入稳定剂以防止抗原与胶体金颗粒聚合沉淀，即得胶体金-鼠抗人血清蛋白结合物。