[发明专利]一种基于高效液相色谱法检测Fmoc-Ser(tbu)-OH有关物质的方法

说明书

本发明公开了一种基于高效液相色谱法检测Fmoc‑Ser(tbu)‑OH有关物质的方法，所述方法包括如下步骤：将水和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相A；将乙腈和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相B；注入待测溶液，以流动相A和流动相B对色谱柱进行梯度洗脱；记录色谱图，并采用面积归一化法计算Fmoc‑Ser(tbu)‑OH的纯度，该种检查方法检测速度较快，结果准确，方法步骤简单，便于操作，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及有机化合物的检测技术领域，具体涉及一种基于高效液相色谱法检测Fmoc-Ser(tbu)-OH有关物质的方法。

背景技术：

Fmoc-Ser(tbu)-OH是合成多肽的重要原料,原料药对杂质鉴定限是小于0.1％，质控限度＜0.15％，控制有关物质限度单杂0.1％的，大大减少药企的工艺研究和质量研究的时间以及成本，只要小于单杂0.1％就不需要研究，超过0.15％的要有依据，所以Fmoc-Ser(tbu)-OH的有关物质研究和控制对原料药和制剂的质量研究都有重要意义，此前未见Fmoc-Ser(tbu)-OH有关物质检测方法的相关报告。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于高效液相色谱法检测Fmoc-Ser(tbu)-OH有关物质的方法，以解决现有技术中缺少对Fmoc-Ser(tbu)-OH的有效检测方法的缺陷。

一种基于高效液相色谱法检测Fmoc-Ser(tbu)-OH有关物质的方法，所述方法包括如下步骤：

将水和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相A；

将乙腈和0.1％TFA的离子对溶液按一定比例配置流动相B；

注入待测溶液，以流动相A和流动相B对色谱柱进行梯度洗脱，所述梯度比例为：

0～20min，流动相B的体积变化为50～100；

20～25min，流动相B的体积变化为100；

25～26min，流动相B的体积变化为100～50；

26～32min，流动相B的体积为50；

记录色谱图，并采用面积归一化法计算Fmoc-Ser(tbu)-OH的纯度。

进一步的，所述0.1％TFA的离子对溶液的体积含量为0.02～1.5％、乙腈的体积含量为10～100％，水的体积含量为体积含量为0～90％。

进一步的，所用色谱柱包括Kromasil 100A C18 5u 250*4.6mm、SinoChrom ODS-BP 5μ4.6mmx250mm或Symmetry Shield RP18 5um 4.6*250mm中的任意一种。

进一步的，所用的色谱柱的固定相为十八烷基硅烷。

进一步的，所述梯度洗脱的柱温为20～50℃。

进一步的，所述梯度洗脱的进样浓度控制在0.25～1.5mg/ml。

进一步的，所述梯度洗脱时紫外线检测器的检测波长为210～240nm。

进一步的，所述梯度洗脱时紫外线检测器的检测波长为220nm。

进一步的，所述梯度洗脱时流动相流速为0.5～1.5ml/min。

进一步的，所述梯度洗脱时流动相流速为1ml/min。

本发明的优点在于：提供了一种新的方法可以检测Fmoc-Ser(tbu)-OH的有关物质，检测速度较快，结果准确，方法步骤简单，便于操作，具有广阔的应用前景。

附图说明