[发明专利]一种新型CRISPR-Cas9系统载体及其应用

权利要求书

1.一种载体，所述载体上依次包括下述功能元件：

上游LoxP序列、sgRNA序列、Cas9蛋白、可诱导启动子、Cre重组酶、同向下游LoxP序列；其中，sgRNA序列和Cas9蛋白顺序可互换；sgRNA序列靶向目的基因。

2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于：所述载体上：sgRNA序列和Cas9蛋白前分别还包括组成型启动子，Cas9蛋白后还包括转录终止元件。

3.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于：所述上游LoxP序列包括SEQ ID NO.1所示序列或其互补序列，同向下游LoxP序列包括SEQ ID NO.9所示序列或其互补序列；或所述上游LoxP序列包括SEQ ID NO.24所示序列或其互补序列，同向下游LoxP序列包括SEQ IDNO.25所示序列或其互补序列；或所述上游LoxP序列包括SEQ ID NO.28所示序列或其互补序列，同向下游LoxP序列包括SEQ ID NO.29所示序列或其互补序列。

4.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于：可诱导启动子包括Mx1、TRE、tTA或ER启动子；可选地，可诱导启动子包括Mx1或TRE启动子；进一步可选地，Mx1启动子序列如SEQ IDNO.7所示；TRE启动子序列如SEQ ID NO.23所示。

5.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于：sgRNA靶向p53基因，进一步可选地，sgRNA序列包括SEQ ID NO.2所示序列或SEQ ID NO.2所示序列的互补序列；

和/或，sgRNA靶向RPGR基因，进一步可选地，sgRNA序列包括SEQ ID NO.18所示序列或SEQ ID NO.18所示序列的互补序列。

6.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于：Cas9蛋白包括saCas9，spCas9，AsCpf1，Cjcas9，NmCas9，St1Cas9或TdCas9；

和/或，Cre重组酶包括为Escherichia virus P1 Cre重组酶，Sphingomonas sp.ERG5Cre重组酶，或Salmonella phage SJ46 Cre重组酶；可选地，Cre重组酶包括Escherichiavirus P1Cre重组酶，其编码序列如SEQ ID NO.8所示。

7.根据权利要求2所述的载体，其特征在于：组成型启动子包括CMV、MSCV或U6启动子；

和/或，转录终止元件包括bGH polyA；可选地，bGH polyA序列如SEQ ID NO.5所示；

和/或，所述载体包括质粒；可选地，所述载体包括病毒载体；进一步可选地，所述病毒载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体或腺相关病毒载体。

8.一种包含权利要求1-7任一项所述载体的细胞，其特征在于：所述细胞包括人细胞、非人哺乳动物细胞、干细胞。

9.一种组合物，其包括权利要求1-7任一项所述的载体，和药学上可接受的辅料。

10.权利要求1-7任一项所述的载体、权利要求8所述的细胞、权利要求9所述的组合物在制备修饰基因或调节基因表达试剂盒或药物中的应用。