[发明专利]检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括：包被抗PRRSV的多克隆抗体的酶标板、抗PRRSV单克隆抗体、HRP标记的羊抗鼠IgG、洗涤液、显色液、终止液、样品裂解液、阳性对照和阴性对照，其特征在于：所述抗PRRSV单克隆抗体是由杂交瘤细胞株3E8分泌获得，所述杂交瘤细胞株3E8保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），其保藏号为：GDMCC No：61302，保藏日期为2020年11月20日；保藏地址为：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼 广东省微生物研究所，所述试剂盒既能检测美洲型的PRRSV病毒，也能检测欧洲型PRRSV病毒，其中所述抗PRRSV单克隆抗体对于PRRSV病毒具有中和活性。

2.根据权利要求1所述的检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒，其特征在于，所述抗PRRSV的多克隆抗体是兔抗PRRSV的多克隆抗体。

3.根据权利要求1或2所述的检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒，其特征在于，所述兔抗PRRSV的多克隆抗体采用如下方法制备得到：利用Marc-145细胞培养PRRSV-NVDC-JXA1株，以超速离心纯化的PRRSV为抗原，与弗氏完全佐剂充分乳化后，皮下分点注射免疫60日龄家兔，5mg抗原/只，15天、30天分别用同样抗原与弗氏不完全佐剂充分乳化后各加强免疫一次，45天后颈动脉插管收集全身血液，4℃静置过夜后3000g离心15min，分离收集血清；用Protein G亲和层析纯化得到所述抗PRRSV的多克隆抗体。

4.根据权利要求1-2中任一项所述的检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒，其特征在于，所述阳性对照是灭活的PRRSV-NVDC-JXA1病毒，浓度为5μg/mL。

5.根据权利要求1-2中任一项所述的检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒，其特征在于，所述阴性对照是灭菌的PBS或SPF猪血清或灭菌ddH₂O。

6.根据权利要求1-2中任一项所述的检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒，其特征在于，所述包被抗PRRSV的多克隆抗体的酶标板采用如下方法制备得到：将抗PRRSV的多克隆抗体按照每孔500ng/100μL包被96孔酶标板，包被液为0.1M pH9.6的碳酸盐缓冲液，37℃包被2h后，4℃过夜，轻柔而果断地甩出孔内液体，用PBST洗涤液洗涤3次，5min每次，在吸水纸上拍干；用10％小牛血清作封闭剂，200μl/孔，37℃封闭90min，用PBST洗涤液洗涤3次，立即使用或贮藏于-20℃备用。

7.根据权利要求1-2中任一项所述的检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法为：将处理好的待测样品加入酶标板，每孔100μL，37℃作用30min，用PBST洗涤液洗涤3次，拍干；每孔加入100ng/100μl的抗PRRSV单克隆抗体，37℃作用30min，用PBST洗涤液洗涤3次，拍干；加入1:5000的HRP--羊抗鼠IgG，100μl/孔，37℃作用30min，用PBST洗涤液洗涤3次，拍干；加入TMB显色液100μl/孔，室温避光作用10～15min，加入2M H2SO4的终止液，50μl/孔，在酶标仪上读取OD450，OD值在0.245以上时判断为阳性。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒在检测PRRSV中的应用，所述应用是指在实验室研究中用于非诊断目的的检测PRRSV。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述PRRSV是指美洲型PRRSV或欧洲型PRRSV中的一种或两种。