[发明专利]检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒

说明书

一种检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括：包被抗PRRSV的多克隆抗体的酶标板、抗PRRSV单克隆抗体、HRP标记的羊抗鼠IgG、洗涤液、显色液、终止液、样品裂解液、阳性对照和阴性对照，其特征在于：所述抗PRRSV单克隆抗体是由杂交瘤细胞株3E8分泌获得。所述试剂盒既可以检测目前主要流行的美洲型的PRRSV病毒，适合用于国内PRRS疫情的防控，也能检测在欧洲地区流行的欧洲型PRRSV病毒，适合作为进出口检疫部门的主要检测手段，最低检出纯化PRRSV‑NVDC‑JXA1的浓度为0.05μg/mL，PRRSV‑DV株的浓度为0.1μg/mL，与RT‑PCR检测的一致性为100%。

技术领域：

本发明属于生物领域，具体涉及一种检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒及其应用。

背景技术：

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的一种以妊娠母猪繁殖障碍以及仔猪呼吸道疾病为主要特征的高度接触性传染疾病，主要临床症状是妊娠母猪繁殖障碍，表现为流产、产死胎、木乃伊胎、弱胎，各龄猪尤其是小猪出现呼吸道疾病，哺乳仔猪高死亡率、免疫抑制和持续性感染等，是目前严重影响世界养猪业健康发展的重要传染病之一，特别是2006年以来，我国及周边国家出现以高热、高发病率和高死亡率为主要特征的高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)，给我国的养猪业造成了重大的经济损失。PRRS难以防控主要是因为：第一，PRRSV可通过各种各样的方式无声无息的进行感染和传播，具有高度传染性；第二，PRRSV作为RNA病毒，具有高度变异性，不同毒株的抗原表位差异较大以及不同疫苗的交叉保护性差，使得防控变得极度棘手；第三，PRRSV可以在猪体内潜伏很长一段时间，一旦机体免疫力低下，PRRSV就会趁虚而入，大量增殖，使猪表现出临床症状，进而患病。

该病毒可以侵害免疫系统造成持续感染，当前普遍通过免疫疫苗的方式进行防控，但是疫苗的大量使用使该疫病的流行情况日益复杂多变，因此建立PRRSV的快速诊断方法，对我国猪群PRRS流行病学调查及疫病的控制具有重要指导意义。PRRS的诊断一般分为病原学和血清学两种。用于检测PRRSV的诊断工具非常重要，由于感染迹象的变化，基于现场临床症状诊断PRRSV非常困难。用于诊断PRRSV的最常见诊断工具有免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)，酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量RT-PCR，间接免疫荧光IFA和血清中和试验等，但是实时荧光定量RT-PCR技术含量及检测成本高，同时容易出现假阳性结果；抗体检测方法以美国IDEXX和法国LSI最为经典，其中IDEXX公司的Herdchek ELISA检测试剂盒以全病毒作为包被抗原，一般为PRRSV抗体检测的标准方法。研究表明，在感染的早期机体就会产生较高水平的抗体，最先能够检测到的是针对N和M蛋白的抗体，抗体检测方法在疫病防控中起重要作用，目前，在众多PRRSV的检测方法中，酶联免疫吸附试验(ELISA)操作简便、快速敏感、易于标准化，非常适合用于大规模流行病学调查和监测，近几年来的用重组表达核衣壳蛋白(如N蛋白)为包被抗原建立的间接ELISA和阻断ELISA商品化标准试剂盒，由于其标准化和程序化的试验操作和生产流程，结果的较为可靠，一致性比较高，临床上大型养殖场的大范围初筛和群体检查常使用这一方法。我国目前PRRSV抗体检测主要依靠国外进口的检测试剂盒，价格昂贵，因此建立特异性好、敏感性高的国产PRRSV抗体检测方法对我国PRRSV防控意义重大，而制备PRRSV高特异性和灵敏度的单克隆抗体对PRRSV的检测方法和检测试剂盒的制备具有重要意义。

发明内容：

为解决以上技术问题，本发明旨在提供一种检测高致病性PRRSV感染的ELISA试剂盒及其应用，该试剂盒以本公司制备得到的抗PRRSV单克隆抗体以及多克隆抗体为基础，通过检测条件的优化，得到了一种具有特异性和高灵敏度的检测试剂盒，

为解决以上技术问题，本发明采用如下技术手段：