[发明专利]一种无共反应剂型电化学发光免疫传感器的制备方法

权利要求书

1.一种无共反应剂型电化学发光免疫传感器的制备方法，包括步骤如下：

（1）以溴化铟为铟源，三（二甲胺基）膦为膦源，溴化锌为稳定剂，以油胺作为溶剂和配体，在无水无氧的条件下制备得到油溶性磷化铟纳米晶（InP NCs）分散溶液；

（2）以油溶性磷化铟纳米晶为纳米晶核，乙酸锌为锌源，正十二硫醇为硫源，在无水无氧的条件下制备油溶性磷化铟/硫化锌纳米晶（InP/ZnS NCs）；

其中，油溶性磷化铟/硫化锌纳米晶的制备过程如下：

向步骤（1）制备的油溶性磷化铟纳米晶分散溶液中加入乙酸锌后通入氮气，在110~130℃下搅拌0.5~1.5h；继续升温至220~240℃，加入正十二硫醇反应0.5~1.5 h；然后将所得溶液离心分离，将所得沉淀经乙醇或二氯甲烷洗涤后，得到油溶性磷化铟/硫化锌纳米晶；

（3）将油溶性磷化铟/硫化锌纳米晶溶于二氯甲烷中，依次加入N,N-二甲基甲酰胺，巯基丙酸及硫代苹果酸，制备水溶性磷化铟/硫化锌纳米晶溶液；

（4）制备水溶性磷化铟/硫化锌纳米晶标记的二抗，即：InP/ZnS|Ab₂；

（5）采用在工作电极表面形成夹心免疫复合物的形式，将InP/ZnS|Ab₂枝接并固定到工作电极表面，制备无共反应剂型电化学发光免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中油溶性磷化铟纳米晶分散溶液的制备过程如下：

（a）将溴化铟（InBr₃）、溴化锌（ZnBr₂）和油胺混合后通入氮气，在110~130℃下搅拌0.5~1.5 h至溶液澄清；

（b）继续升温至200~210℃，加入三（二甲胺基）膦和油胺反应10~30min至溶液由无色变为红色，得到油溶性磷化铟纳米晶（InP NCs）分散溶液。

3.根据权利要求2所述的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）油溶性磷化铟纳米晶（InP NCs）分散溶液的制备过程中，条件如下：

步骤（a）中溴化铟：溴化锌：油胺的物质的量比=17：110：750；

步骤（b）中三（二甲胺基）膦的浓度为2~2.5mmol/mL，三（二甲胺基）膦：油胺的体积比=1：（1~1.2）。

4.根据权利要求2所述的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤（1）中油溶性磷化铟纳米晶分散溶液的制备过程如下：

将0.34 mmol溴化铟、2.2 mmol溴化锌和5 mL 3mmol/L油胺放入三口烧瓶，在控温加热磁力搅拌器中混合后，通入氮气，在120℃下搅拌1 h，除去混合溶液中的水及氧气直至溶液澄清；继续升温至200℃，加入1mL 2.4mmol/mL的三（二甲胺基）膦和1mL油胺，反应20 min至溶液由无色变为红色，停止加热，得到油溶性磷化铟纳米晶分散溶液。

5.根据权利要求1所述的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述乙酸锌：正十二硫醇的物质的量比=5：2；所述乙酸锌和步骤（1）所述溴化铟的物质的量比=50：17。

6.根据权利要求1所述的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤（3）中水溶性磷化铟/硫化锌纳米晶（InP/ZnS NCs）的制备过程如下：

将步骤（2）制备的油溶性磷化铟/硫化锌纳米晶（InP/ZnS NCs）溶于二氯甲烷，然后加入N,N-二甲基甲酰胺、巯基丙酸和硫代苹果酸，通入氮气，在120~140℃下加热10~30min进行配体交换，将配体交换后的量子点用甲醇洗涤三次，得到水溶性磷化铟/硫化锌纳米晶，配置成4mg/mL的水溶性磷化铟/硫化锌纳米晶溶液置于4℃冰箱中储存备用；

所述二氯甲烷：N,N-二甲基甲酰胺：巯基丙酸的体积比=4：6：1；

所述硫代苹果酸和步骤（1）所述溴化铟的物质的量比=25：17；

所述二氯甲烷和步骤（1）所述溴化铟的体积质量比为50：3，单位：mL/g。