[发明专利]一种全血核酸提取用裂解结合液及其试剂盒和应用

说明书

本发明涉及一种全血核酸提取用裂解结合液，由以下物质的水溶液组成：盐酸胍，碘化钠，EDTA，tritonX‑100，Tween20，Tris‑HCl，SDS，NP‑40。本发明提供的裂解结合液可进行边裂解边吸附，减少了操作步骤，且不含有机溶剂，进而和仪器相结合可进行自动化提取，可批量化处理样本。本发明通过研究裂解液的裂解性能实验，调整各试剂组成和配比，经过发明人的大量实验改进，获得了高效提取核酸的裂解液配方。可以保证所提取全血的核酸纯度好，浓度高，比对照试剂提取的核酸条带更清晰明亮，提取效率更高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种全血核酸提取用裂解结合液，还涉及到应用该裂解结合液制备的核酸提取的试剂盒。

背景技术

核酸是一切生物体的遗传物质，广泛存在于所有动植物、微生物体内，包括脱氧核糖核酸(RNA)和核糖核酸(DNA)两类。随着分子生物学技术广泛应用于生物医学及其相关领域，核酸的提取及纯化技术也得到进一步的发展。核酸的提取主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分离。核酸提取和纯化是核酸检测的关键环节，核酸提取的效率和纯度对下游核酸检测起至关重要的作用。

自1869年Miescher首次成功发现并分离出DNA，以及1957年MeselsonM等首次采用密度梯度离心法分离DNA以来，报道了多种核酸提取方法，如：如酚氯仿法、离心柱提取法、玻璃粉吸附法、碱裂解法和EtBr-CsCl梯度离心法。许多研究者在核酸的提取方法上进行了不懈的探索，对核酸的各种材料和试剂进行了改进，十二烷基磺酸钠、酚、脲和胍盐等各种试剂纷纷被应用到核酸提取实验中，各种用于核酸提取的商品化试剂盒也应运而生。这些传统提取方法可从不同组织样本中分离出DNA和RNA，但这些技术中包含沉淀和离心等操作步骤，其所需的生物样本量较大，且提取的步骤较为繁杂、费时费力，得率也不高，难以实现自动化操作，另外，大部分的传统方法中还需要用到有毒化学试剂，对操作人员的健康具有潜在危害，因此，伴随着分子生物学以及高分子材料学的发展，从液相系统中分离核酸的传统技术逐渐被以固相载体为基础的新方法所取代，目前常见固相材料有硅胶、玻璃颗粒、硅藻土、阴离子交换载体等。但这些固相法通常需采取数次快速离心、真空抽滤等步骤来实现分离，而且对于样本需求量大，耗费样品较多，不便于高通量、自动化操作，严重限制了在临床基因诊断领域的应用。而磁珠法运用纳米磁珠可特异性的识别和高效结合核酸分子，在外加磁场和胍盐的作用下，能从血液、组织和病原微生物等样本中分离出核酸，可用于临床疾病的诊断。磁珠法便于自动化、操作简便、提取时间短、安全无毒。

随着分子生物学技术的发展，为满足高通量处理样本和获得高质量核酸的实验要求，核酸提取分离技术也更趋向于简便快捷、高质量、高纯度和高通量发展，核酸质量的好坏直接决定了后续实验的成败。近年来分子诊断技术快速发展，随着基因测序等技术的成熟，成本进一步降低，在临床上的应用也越来越普遍。分子诊断检测的样本类型多达数十种，而处理后产物适用的检测项目也涵盖了荧光定量PCR、基因测序、基因芯片、生物质谱等各类分子生物学技术平台。然而，无论是哪一类检测项目，准确的检验结果无疑依赖于高质量的标本及标本前处理过程。因此临床分子诊断自动化趋势将逐步在国内临床实验室成为主导，而自动化首先将在目前手工操作较普及且对结果影响最大的核酸提取上实现。