[发明专利]烟酰胺单核苷酸的酶促合成方法有效
| 申请号： | 202110160981.6 | 申请日： | 2021-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN112961890B | 公开（公告）日： | 2023-06-27 |
| 发明（设计）人： | 李钊 | 申请（专利权）人： | 深圳希吉亚生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/30 | 分类号： | C12P19/30 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 唐致明 |
| 地址： | 518101 广东省深圳市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 烟酰胺单 核苷酸 合成 方法 | ||
1.烟酰胺单核苷酸的酶促合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
S0：以胞苷酸为原料，在胞苷酸水解酶催化作用下，生成核糖-5-磷酸；
S1：以所述核糖-5-磷酸、胞苷酸、多聚磷酸盐、烟酰胺为原料，在磷酸核糖焦磷酸化酶、多聚磷酸激酶和烟酰胺磷酸核糖转移酶催化作用下，生成烟酰胺单核苷酸；
其中，所述磷酸核糖焦磷酸化酶的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述多聚磷酸激酶的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述烟酰胺磷酸核糖转移酶的核苷酸序列如SEQ IDNo.4所示，所述胞苷酸水解酶的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述胞苷酸水解酶、所述磷酸核糖焦磷酸化酶、所述多聚磷酸激酶和所述烟酰胺磷酸核糖转移酶的酶活力比例为1：(2-3)：(2-3)：1；
S0中，所述胞苷酸的浓度为100～150mM，所述胞苷酸水解酶的添加量为400～600U/L；
S1中，所述烟酰胺的浓度为100～150mM，所述多聚磷酸盐的浓度为60～80mM，所述胞苷酸的浓度为2～6mM，所述磷酸核糖焦磷酸化酶的添加量为1000～1500U/L，所述多聚磷酸激酶的添加量为1000～1500U/L，所述烟酰胺磷酸核糖转移酶的添加量为400～600U/L，S1的反应温度为35～37℃，反应pH为7.2～7.8，反应时间为8～12h。
2.根据权利要求1所述的酶促合成方法，其特征在于，S1中还添加有Mg2+。
3.根据权利要求2所述的酶促合成方法，其特征在于，S1中Mg2+的浓度为50～100mM。
4.根据权利要求1所述的酶促合成方法，其特征在于，S1后还包括S2：酶促反应结束后，调节pH至7以下，除去沉淀。
5.根据权利要求4所述的酶促合成方法，其特征在于，调节pH至2以下。
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