[发明专利]一种表达D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌

权利要求书

1.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌是以枯草芽孢杆菌168为表达宿主，以pMA5为表达载体表达了氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示的来源于Dorea sp.CAG317的D-阿洛酮糖 3-差向异构酶和氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示的来源于Clostridium cellulolyticum H10的D-阿洛酮糖 3-差向异构酶；同时，采用启动子spovG强化表达Dorea sp.CAG317的D-阿洛酮糖 3-差向异构酶，采用srfA启动子强化表达Clostridium cellulolyticum H10的D-阿洛酮糖 3-差向异构酶；所述启动子srfA的核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示；所述启动子spovG的核苷酸序列如SEQ ID NO. 6所示。

2.一种构建权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）构建重组质粒：将包含启动子spovG和来源于Dorea sp.CAG317的D-阿洛酮糖 3-差向异构酶DS的片段、包含启动子srfA和来源于Clostridium cellulolyticum H10的D-阿洛酮糖 3-差向异构酶RC的片段，与pMA5质粒通过酶切后连接，得到重组质粒pMA5-DS-RC；

（2）构建重组枯草芽孢杆菌：将步骤（1）得到的重组质粒pMA5-DS-RC转化到枯草芽孢杆菌168中，得到重组枯草芽孢杆菌。

3.一种减弱褐化反应的方法，其特征在于，将权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌添加至含有D-果糖的反应体系中进行反应。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，添加所述重组枯草芽孢杆菌的OD₆₀₀至少为15。

5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述反应的条件为：pH 6.0~7.0，温度55~65℃。

6.权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌在食品加工过程中减弱褐化反应中的应用，或在制备D-阿洛酮糖中的应用。