[发明专利]一种耐盐腺苷酸环化酶的基因、重组载体、重组菌及其应用有效
| 申请号： | 202110163662.0 | 申请日： | 2021-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN112725369B | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 应汉杰;姜达海;牛欢青;陈勇;柳东;余斌 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/60 | 分类号： | C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/32;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 211800 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 腺苷酸环化酶 基因 重组 载体 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种在高渗条件下利用重组菌制备环磷酸腺苷的方法，其特征在于，所述重组菌包含重组载体，所述重组载体包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的基因，所述重组载体的出发载体为pET28a，所述重组菌的宿主细胞为
（1）构建包含SEQ ID NO.1所示的基因的重组菌并活化，将活化的重组菌接种到LB培养基中，培养至OD600nm为0.6-0.8时，加入诱导剂IPTG，IPTG的终浓度为0.1-1.2 mM，诱导表达4-15 h，离心收集菌泥；
（2）全细胞催化：向Tris-HCl缓冲液中添加ATP、氯化镁、氯化钠、表面活性剂和步骤（1）得到的菌泥，建立全细胞催化反应体系，进行全细胞催化反应，生成cAMP；所述Tris-HCl缓冲体系的浓度为100 mM，所述ATP的浓度为30 mM，所述氯化镁的浓度为50 mM，所述氯化钠浓度为2.2 M，所述表面活性剂为0.5 % （v/v）的Triton X-100，所述菌泥的用量为5g/L，催化条件为pH 10.0，40℃反应6 h。
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