[发明专利]一种宫颈拭子核酸提取的裂解结合液、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及核酸提取的技术领域，公开了一种宫颈拭子核酸提取的裂解结合液、试剂盒及方法，裂解结合液包含以下浓度的组分：1‑5％十二烷基磺酸钠、0.5‑2％聚乙二醇辛基苯基醚、100‑300mM 4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、8‑12％氯化钠、50‑150mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.5‑3mM EDTA和1‑3％月桂醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠盐，使用本发明的裂解液能够有效提高核酸的提取效率。

技术领域

本发明涉及核酸提取的技术领域，特别是一种宫颈拭子核酸提取的裂解结合液、试剂盒及方法。

背景技术

随着医疗技术的发展，对于女性健康的关注越来越多。妇科疾病的诊治之前需要使用宫颈拭子进行宫颈细胞和体液采集，然后对采集到的细胞和体液进行分析，得到医学上的判断，做出治疗方案。

目前核酸提取方法主要有加热裂解法、酚氯仿抽提法、离心柱法和磁珠法；其中磁珠法采用超顺磁性纳米颗粒，利用在高盐低pH下吸附核酸，然后在低盐高pH下分离核酸的原理进行样本核酸的分离纯化，磁珠法核酸提取的步骤主要包括：(1)裂解；(2)结合；(3)洗涤；(4)分离四大部分，具体为样品在裂解液作用下，DNA/RNA释放出来后与经过表面修饰的具有超顺磁性纳米磁珠进行特异性结合，形成核酸-磁珠复合物，然后加入洗涤液，洗去非特异性吸附的蛋白质等杂质，最后在磁场条件下分离富集磁珠，最后用洗脱液从磁珠上洗脱核酸，得到欲提取的DNA/RNA。磁珠法因其只需要在磁场作用下就能将核酸分离纯化出来，故其能实现高通量自动化标准化操作。

然而目前市场上的基于磁珠法的商品化试剂操作过于复杂，并且需要一定温度下使用蛋白酶K等进行孵育，同时需要多步洗涤等步骤，导致其自动化程度偏低，核酸提取的重复性差及提取效率低。

发明内容

为此，需要提供一种宫颈拭子核酸提取的裂解结合液、试剂盒及方法，解决现有核酸提取过程步骤繁琐，提取率低等问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种宫颈拭子核酸提取的裂解结合液，包含以下浓度的组分：1-5％十二烷基磺酸钠、0.5-2％聚乙二醇辛基苯基醚、100-300mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、8-12％氯化钠、50-150mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.5-3mM EDTA和1-3％月桂醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠盐。

进一步，包含以下浓度的组分：2％十二烷基磺酸钠、1％聚乙二醇辛基苯基醚、200mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、10％氯化钠、100mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、1mM EDTA和2％月桂醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠盐。

进一步，所述裂解结合液的pH值保持在7.0-8.0。

一种宫颈拭子核酸提取试剂盒，包括上述的裂解结合液和磁珠溶液，所述磁珠溶液由磁珠和防腐剂混合而成，所述磁珠用于吸附DNA，所述磁珠溶液的浓度为200-400μg/ml。

进一步，所述磁珠的用量为300μg/ml。

一种宫颈拭子核酸提取的方法，包括如下步骤：

(1)在离心管中加入上述的裂解结合液和磁珠溶液混匀，之后加入宫颈拭子样品，漩涡振荡混合均匀5-20s，之后在70-95℃水浴下静置1-2min，所述磁珠溶液和裂解结合液的体积比为1:20-40，宫颈拭子样品与裂解结合液的体积比为1:2-5；

(2)将步骤(1)的离心管从水浴中取出，静置，冷却至25℃以下；

(3)将步骤(2)中冷却完成的离心管涡旋5-15s，之后将离心管置于磁力架上，至磁珠全部吸附至离心管壁且离心管内液体澄清后，吸弃液体；

(4)移去磁力架，在离心管中加入DNA洗脱液，所述NA洗脱液与宫颈拭子样品的体积比为1:2-5，用移液器吸头吹打或悬浮震荡管壁磁珠，直至离心管内液体分布均匀，收集离心管内的洗脱液体。