[发明专利]一种鉴定拟无枝酸菌的检测方法有效
| 申请号： | 202110164167.1 | 申请日： | 2021-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN112899382B | 公开（公告）日： | 2022-12-06 |
| 发明（设计）人： | 唐标;杨华;吴静;钱鸣蓉 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 韩聪 |
| 地址： | 310021 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 拟无枝酸菌 检测 方法 | ||
1.引物对在鉴定拟无枝酸菌(Amycolatopsis)中的应用，其特征在于，所述引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列为:5’-TSGARGGCAANCACGACGC-3’，下游引物的核苷酸序列为:5’-AYGTASGGRTGNCCGGTGA-3’。
2.一种鉴定拟无枝酸菌(Amycolatopsis)的PCR检测试剂盒，其特征在于，包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列为:5’-TSGARGGCAANCACGACGC-3’，下游引物的核苷酸序列为:5’-AYGTASGGRTGNCCGGTGA-3’。
3.一种鉴定拟无枝酸菌(Amycolatopsis)的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待测菌株的DNA；
(2)以提取的DNA为模板，构建PCR反应体系，其中上游引物的核苷酸序列为:5’-TSGARGGCAANCACGACGC-3’，下游引物的核苷酸序列为:5’-AYGTASGGRTGNCCGGTGA-3’，进行PCR反应；
(3)PCR产物进行凝胶电泳分离，染色，结果判断：如出现244bp的条带，说明待测菌株为拟无枝酸菌属，否则，说明待测菌株为非拟无枝酸菌属。
4.如权利要求3所述的鉴定拟无枝酸菌(Amycolatopsis)的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，构建荧光定量PCR反应体系，进行qPCR反应，结果判断还包括分析Ct值，如Ct值小于30，说明待测菌株为拟无枝酸菌属，否则，说明待测菌株为非拟无枝酸菌属。
5.如权利要求4所述的鉴定拟无枝酸菌(Amycolatopsis)的检测方法，其特征在于，PCR反应体系为：以20μL计，2×TB Green Fast qPCR Mix 10μL，10mmol/L上游引物0.8μL，10mmol/L下游引物0.8μL，200μg/μL模板DNA 1μL，ddH2O 7.4μL。
6.如权利要求4所述的鉴定拟无枝酸菌(Amycolatopsis)的检测方法，其特征在于，PCR反应条件为：1)90～95℃预变性；2)90～95℃变性30s，60～65℃退火30s；72℃延伸30s，共30～40个循环；3)72℃延伸。
7.如权利要求6所述的鉴定拟无枝酸菌(Amycolatopsis)的检测方法，其特征在于，PCR反应条件为：1)95℃预变性2min；2)95℃变性30s，61℃退火30s，72℃延伸30s，共40个循环；3)72℃延伸12min。
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