[发明专利]一种CD22纳米抗体、分离的核酸分子、药物组合物及其应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种CD22纳米抗体、分离的核酸分子、药物组合物及其应用。本发明通过人源CD22重组蛋白免疫羊驼后从羊驼外周血中筛选获得具有特定序列信息的纳米抗体，并通过特定核苷酸突变修饰的人源化处理，筛选获得具有高的特异性和安全性的人源化纳米抗体。本发明纳米抗体能够作为活性成分制备药物，用于治疗B细胞肿瘤或其他以CD22为治疗靶标的疾病，也能够用于制备诊断试剂，同时也可以作为抗原结合结构域序列，制备嵌合抗原结合受体、载体和免疫效应细胞，对表达CD22蛋白的细胞产生靶向裂解作用。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种CD22纳米抗体、分离的核酸分子、药物组合物及其应用。

背景技术

纳米抗体最早在1993年由Hamers等报道，羊驼血液中存在一种天然缺失轻链和重链恒定区1(CH1)的重链抗体，克隆其可变区得到只有一个重链可变区组成的单域抗体，称其为VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody)。VHH晶体为2.5nm,长4nm,分子量只有15KDa，如今称为“纳米抗体”（Nanobody,Nb）。该抗体只包含一个重链可变区(VHH)和两个常规的CH2与CH3区，但却不像人工改造的单链抗体片段(scFv)那样容易相互沾粘，甚至聚集成块。更重要的是单独克隆并表达出来的VHH结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性，是目前已知的具有完整功能的最小抗原单位。基于其独特的空间结构，纳米抗体具有许多优异的特性，易于获得和表达、高稳定性、高水溶性、高特异性强的抗原表位等，此外还具有相对分子质量小、与人源IgG序列同源、亲和力高、免疫原性低、穿透力强、人源化简单以及可在细菌中大量表达等优点。不仅如此，纳米抗体VHH的结构仅由重链可变区构成，缺乏Fc片段，便可以利用不同标签来表达纳米抗体，并方便收集。与传统单克隆抗体相比，VHH在疾病的诊断治疗及药物开发等医学领域具有更广阔的应用前景。

CD22 是唾液酸结合受体蛋白超家族 (Siglec,sialic acid binding receptorprotein superfamily) 的一员，且其是一种B系分化抗原，表达于B细胞发育的各个阶段，B细胞分化为浆细胞后不再表达CD22。在体内，B 细胞代表 CD22的主要来源。60％～80％的B细胞恶性肿瘤表达CD22。几乎所有的B前体细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)表达CD22；90％以上的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCLs)和滤泡淋巴瘤(FLs)为CD22阳性；慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)、毛细胞白血病(HCL)也具有高水平的CD22表达。目前已有许多临床试验研究证实了靶向CD22的药物的有效性。CD22单克隆抗体——依他珠单抗(Epratuzumab)，在治疗成人和儿童B-ALL中具有一定的效果；CD22免疫毒素对HCL和B-ALL有一定的治疗作用，但是现有的市售CD22抗体类药物在结合亲和力上仍然存在一定的缺陷，研究开发出相比现有CD22抗体更高亲和力的纳米抗体，对相关肿瘤疾病的治疗具有重要的前景意义。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的之一在于提供一种CD22纳米抗体，对靶向抗原CD22具有高的结合特异性、稳定性和安全性。

本发明的目的之二在于提供一种分离的核酸分子，用于编码本发明CD22纳米抗体。

本发明的目的还在于提供本发明抗体和核酸分子的应用，制备药物、诊断试剂、多特异性抗体、抗原结合受体、载体或免疫效应细胞，用于诊断或治疗与CD22相关的疾病。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种CD22纳米抗体，包括重链可变区，其中重链互补决定区CDR1的氨基酸序列为GFTLDHYH，如SEQ NO：1所示；CDR2的氨基酸序列为ISNSGGST，如SEQ NO：2所示；CD3氨基酸序列为AAGRWYYDGSRYCPPGAMDY，如SEQ NO：3所示。