[发明专利]一种牛皮癣动物模型的构建方法

权利要求书

1.一种牛皮癣动物模型的构建方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)至少两种革兰氏阳性菌的纯化培养；

(2)光密度值(OD)为0.6至0.8的革兰氏阳性菌混合细菌悬液的制备；

(3)在无菌条件下对适龄动物模型指定区域体表皮肤组织表面或伤口表面进行所述混合细菌悬液的施用；

(4)刮片接种鉴定，即刮取表皮组织并在显微镜下观察死亡细胞密度和与所述混合细菌悬液同菌株的细菌个体的密度。

2.根据权利要求1所述的牛皮癣动物模型的构建方法，其特征在于，制备所述革兰氏阳性菌混合细菌悬液的步骤包括：纯化菌株按照培养条件优先级的顺序依次接种于液体培养基中，纯化菌株接种于所述液体培养基中的顺序与接种纯化菌株所需的培养条件正比分布即培养条件多则其培养顺序相对靠前，以使得在接种过程结束后所有接种菌株在液体培养基中的浓度能够分别达到1*10⁴CFU/ml。

3.根据权利要求1或2所述的牛皮癣动物模型的构建方法，其特征在于，所述细菌悬液的施用即基于OD值为0.6～0.8的浓度值的所述细菌悬液按照能够满足在指定区域体表皮肤组织处以体积20ul/cm²的施用方式通过涂抹、悬滴或皮下注射接触指定区域体表皮肤组织。

4.根据前述权利要求之一所述的牛皮癣动物模型的构建方法，其特征在于，所述革兰氏阳性菌至少包含葡萄球菌、链球菌或分支杆菌以保证接种后皮肤组织能够产生炎症反应。

5.根据前述权利要求之一所述的牛皮癣动物模型的构建方法，其特征在于，所述动物模型基于不同减毒活性的细菌悬液的施用设置分组，不同减毒程度的金黄色葡萄球菌的施用能够探究炎症发病速度和体内炎症因子浓度与牛皮癣发病速度的相关性。

6.根据前述权利要求之一所述的牛皮癣动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法还包括基于刮片结果对死亡细胞密度和与所述混合细菌悬液同菌株的细菌个体的密度的检测，当死亡细胞数量占刮片总细胞数量的40％以上、且所述混合细菌悬液同菌株的细菌数量占刮片总细胞数量的15％以上时，判定牛皮癣动物模型的构建成功。

7.一种牛皮癣动物模型组的构建方法，其特征在于，基于诱发牛皮癣疾病因素的多样化，所述牛皮癣动物模型组按照接受与牛皮癣疾病呈强相关性的主基因表达量变化、布置强压力生存环境、外源注射蛋白质水平的感染剂以及外源施用能够引起炎症反应的混合细菌等刺激的方式在造模过程中暴露于至少两个刺激条件之下。

8.根据权利要求7所述的牛皮癣动物模型组的构建方法，其特征在于，造模的刺激条件以混合细菌接种作为主效因素，并且在主效因素的施加过程中增减其他相关刺激条件以构建多因素诱发牛皮癣的模型组。

9.根据权利要求7或8所述的牛皮癣动物模型的构建方法，其特征在于，所述模型组包含基于诱发牛皮癣的转基因动物样品进行细菌接种的动物模型一和基于咪喹莫特诱发的牛皮癣动物样品进行细菌接种的动物模型二，并且通过对动物模型一和动物模型二施加正向或反向的刺激条件调控炎症因子的浓度和生成速度。

10.根据权利要求7～9之一所述的牛皮癣动物模型的构建方法，其特征在于，组别内部设置的动物个体数量大于10以保证在排除造模期间动物个体表皮组织结构及表皮性状变化异常的个体时能够存在充足的统计个体。