[发明专利]一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法

权利要求书

1.一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1外植体的预处理:选取5月初刚采收的方竹种子作为外植体材料，先将种子用洗洁精洗净，流水下冲洗4～5h，然后用吐温80浸泡10min，流水下再冲洗0.5～1h；

S2外植体的消毒: 在无菌操作台上，将步骤S1处理好的方竹种子经70-80%酒精灭菌处理45-60s，无菌水冲洗3～5次，再用质量百分比为10%的次氯酸钠溶液消毒15min，无菌水冲洗3～5次；

S3接种: 将步骤S2消毒后的种子接种至MS+2mg/L 6-BA基本培养基上；

S4丛芽诱导: 将步骤S3得到的无菌方竹种子接种至MS+3mg/L 6-BA +0.5mg/L KT诱导培养基上进行丛芽诱导，诱导25 d后方竹种子先后生出具根以及2～3个芽的小苗；

S5丛芽培养: 将步骤S4中长有2～3个芽的小苗剪掉根和种子，并接种至MS+4mg/L 6-BA+0.5mg/L TDZ增殖培养基中，培养40d后至丛芽形成，在增殖培养基中继代2次，至大量丛芽形成；

S6生根培养:将步骤S5得到的丛芽接种至生根培养基MS+4mg/L 6-BA+1mg/L NAA,培养30d至生根组培苗形成。

2.根据权利要求1所述的一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法，其特征在于，所述基本培养基、诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中均含有30g/L蔗糖和2.25g/L植物凝胶。

3.根据权利要求1所述的一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法，其特征在于，步骤S2中所述次氯酸钠溶液中滴加有3～4滴吐温80。

4.根据权利要求1所述的一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法，其特征在于，步骤S3、S4、S5和S6中培养温度为25±1℃。

5.根据权利要求1所述的一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法，其特征在于，步骤S3、S4、S5和S6中光周期为14h光照/10h黑暗。

6.根据权利要求5所述的一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法，其特征在于，步骤S3、S4、S5和S6中培养物表面的光照强度为3000lx。