[发明专利]一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法

说明书

本发明属于一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法，包括以下步骤：选取5月初刚采收的方竹种子作为外植体材料，经过预处理、消毒、接种、丛芽诱导、培养和生根生成组培苗。本发明填补了方竹种子通过种子作为外植体快速繁殖得到丛苗的空白，以方竹种子为外植体材料，结合不同生长调节剂的组合，设计出适合诱导方竹丛芽和生根的培养基，完成方竹种子生根苗仅为20周左右，且能在短时间内获得大量丛芽，有效解决了方竹繁殖困难，克服了传统的母株移栽效率低、运输成本高等缺点。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法。

背景技术

方竹属（Chimonobambusa）由日本学者牧野富太郎(Tomitaro Makino) 于1914年发表成立，当时方竹属只有寒竹一个种。寒竹原产我国和日本，早在19世纪，就被引种到英国。方竹属的竹种在长期演化过程中逐渐适应寒冷、喜湿和耐阴的环境，因此，它们主要分布在中高海拔的山地。方竹的自然分布在秦岭以南各省区和西藏南部，但集中分布的地区在贵州、四川、重庆和云南等省区。向南延伸至越南和缅甸，向东延伸至日本。其中寒竹、方竹等观赏价值以及经济价值较高的竹种被广泛引种栽培。

据确切记载，方竹曾经于1935-1938年在重庆南川的金佛山和相邻贵州省桐梓县的柏芷山和箐坝大山大面积开花。自1985年至今，方竹分布区内又出现多地零星开花现象，面积在半亩到十亩不等（张弘,邹家云,王永燕.桐梓县金佛山方竹开花结实的探讨.竹子研究汇刊. 1994,13(2):66-69）。方竹的果实与我们常见的水稻、小麦和玉米等禾本科植物的果实一样，都属于颖果。但不同的是方竹的果实成熟时含水量较高，果皮（种皮）大多呈绿色或略带一点紫色。因此，也称为浆果状颖果。近年来，桐梓县利用方竹的实生苗进行大规模的造林。

随着人们生活水平和文化水平的提高，竹子的经济价值逐渐凸显，其重要性愈加突出。方竹笋乃纯天然保健食品，为笋中之王，世界一绝，中国独有。一直以来，竹子繁殖主要以移竹、竹蔸、埋鞭、埋秆、埋节等传统方法为主，这些方法具有消耗母竹多、种苗运输不便、劳动强度大、繁殖系数低等缺点，尤其对资源稀少的珍贵竹种来说，传统的繁殖方法受到了较大限制，难以快速规模化发展资源。针对这些问题，近几年人们开始研究竹类植物新的繁殖方法，其中最直观有效的就是竹类组织培养获得再生植株。

国内有关竹子的组织培养最早开始于20世纪90年代，此后，关于竹类植物组织培养的研究日益增多，竹子的快繁技术受到愈来愈多的重视。目前对竹子以芽繁芽途径大多数均采用秆茎段的方式，而关于通过以方竹种子为外植体高效快繁的方法未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法，以缓解方竹鲜笋市场集中供应，造成产品积压、价格下降、竹农收益降低的问题，具有广泛的经济价值和推广意义。

本发明的目的是提供一种以方竹种子为外植体高效繁育的方法，包括以下步骤：

S1外植体的预处理:选取5月初刚采收的方竹种子作为外植体材料，先将种子用洗洁精洗净，流水下冲洗4～5h，然后用吐温80浸泡10min，流水下再冲洗0.5～1h；

S2外植体的消毒: 在无菌操作台上，将步骤S1处理好的方竹种子经70-80%酒精灭菌处理45-60s，无菌水冲洗3～5次，再用质量百分比为10%的次氯酸钠溶液消毒15min，无菌水冲洗3～5次；

S3接种: 将步骤S2消毒后的种子接种至MS+2mg/L 6-BA基本培养基上；

S4丛芽诱导: 将得到的无菌方竹种子接种至MS+3mg/L 6-BA+0.5mg/L KT诱导培养基上进行丛芽诱导，诱导25 d后方竹种子先后生出具根以及2～3个芽的小苗；

S5丛芽培养: 将步骤S4中长有2～3个芽的小苗剪掉根及种子，并接种至MS+4mg/L6-BA+0.5mg/L TDZ增殖培养基中，培养40d后至丛芽形成，在增殖培养基中继代2次，至大量丛芽形成；