[发明专利]一种核壳纳米多聚物的制备方法及其在辅酶循环再生上的应用

权利要求书

1.一种核壳纳米多聚物的制备方法及其在辅酶循环再生上的应用包含以下步骤；

（1）辅酶多聚物的制备

利用模板法制备粒径为60-90 nm的介孔硅纳米颗粒，然后对其表面进行基团修饰，将修饰后介孔硅与辅酶（NAD⁺和NADH，NADP⁺和NADPH等两个组合中的一种）的非活性位点结合制备辅酶聚合物，备用；

（2）多酶原位共固定化

采用原位合成的方法将酶进行共固定：将乙酸锌（硝酸锌、乙酸钴等）2-甲基咪唑、三乙胺、辅酶聚合物、两种辅酶依赖性酶按照一定比例分散于pH 7-9的PBS溶液中，15-25 ℃磁力搅拌12-20 h、冷冻干燥后得。

2.根据权利要求书1所述，其特征在于，可以用ZIF-8材料或者ZIF-67材料作为多聚物外壳；用ZIF-8封装时，按质量比计，乙酸锌:2-甲基咪唑=10:1-15:1，硝酸锌：2-甲基咪唑=1:3-1:5；用ZIF-67封装时，按质量比计，乙酸钴：2-甲基咪唑：三乙胺=3:1:0-5:1:18。

3.根据权利要求书1-2所述，其特征在于，多聚物中共固定化的两种辅酶依赖性酶在催化反应过程中一个需要同一组辅酶的参与；两种辅酶依赖性酶与辅酶聚合物的质量比为1:1:2-1:5:10。

4.根据权利要求书1-3所述，其特征在于，将制备的核壳多聚物分散于PBS溶液中，添加引发剂和辅酶再生底物实现辅酶的循环再生。

5.根据权利要求书1-4所述的方法，其特征在于，ZIF外壳对酶具有亲和性，使得辅酶依赖性酶聚集到辅酶聚合物周围，减少底物的扩散，促使辅酶因子在体系内快速转化，从而实现辅酶的循环再生和进行双酶级联反应；将其应用在需要辅酶参与的生物催化中，可以避免昂贵辅酶的投入。