[发明专利]一种CO2

权利要求书

1.一种CO₂响应性微纳米递药系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）聚乳酸聚赖氨酸：0.1-0.5g Mn=5000聚乳酸溶于5-25mL氯仿，加0.0116-0.0576gN-羟基琥珀酰亚胺、0.0192-0.096g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，室温氮气反应4h；加64-316μL乙二胺，反应24-48h；取反应液上清旋蒸至浑浊，加4-20mL无水乙醚，6000-8000rpm离心10min，得沉淀；沉淀用超纯水MWCO3500透析3天，冷冻干燥，得端氨基聚乳酸（PLA-NH₂）；1-2g N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸溶于14-27mL四氢呋喃，50℃氮气保护反应10min，0.26-1.05g三光气溶于7-13mL 四氢呋喃后滴加入N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸溶液中，继续反应1-2h；冷却后加入至50-110mL正己烷中，静置24h，沉淀于室温真空干燥24h得苄氧羰基赖氨酸酸酐（Lys(Z)-NCA）；将0.02-0.05g端氨基聚乳酸（PLA-NH₂）溶解到3-7mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入0.07-0.17g苄氧羰基赖氨酸酸酐（Lys(Z)-NCA），40℃氮气保护反应72h，于MWCO3500透析3天，冷冻干燥得聚乳酸-聚（N^ε-苄氧羰基-L-赖氨酸）（PLA-PZLL）；然后取0.1-0.5g PLA-PZLL，加入4-20mL三氟乙酸，氮气冰水浴反应30min；滴加0.3-1.5mL质量浓度33%氢溴酸的乙酸溶液，继续反应1h，反应体系逐滴加入10-50mL无水乙醚，于6000-8000rpm离心10min，得沉淀，沉淀用超纯水MWCO3500透析3天，冷冻干燥，得聚乳酸-聚赖氨酸聚合物（PLA-PLL）；

（2）修饰聚乳酸-聚赖氨酸：将0.02-0.1g聚乳酸-聚赖氨酸聚合物用二甲基亚砜溶解，再加入8-40μL N,N二甲基乙酰胺二甲缩醛，60-70℃，氮气保护反应3-4h，反应液用超纯水MWCO3500透析3d，冷冻干燥，得修饰的聚乳酸-聚赖氨酸（PLA-mPLL）；

（3）PLA-mPLL/BUD纳米粒的制备：5-20mg修饰的聚乳酸-聚赖氨酸（PLA-mPLL）与4-16mg布地奈德溶于5-20mL二甲基亚砜，缓慢滴加到等量的旋转搅拌的超纯水中反应2h，然后将反应液于MWCO为3500透析2-3天，收集透析液，冷冻干燥，得粒径为200-250nm的PLA-mPLL/BUD纳米粒，经CO₂作用粒径增大30-50nm；

（4）酵母微囊（YGM）的制备：将酵母细胞分散于1mol/L的NaOH溶液30mL中，90℃反应1h，然后于8000-12000rpm离心10-15min，弃去上清液，得沉淀，沉淀用30mL超纯水洗涤两次，加入pH4-5盐酸溶液30mL，75℃反应2h，在3000-4000rpm离心10-15min，得沉淀，沉淀依次用20mL超纯水洗涤3次、15mL异丙醇洗涤4次、15mL丙酮洗涤2次，3000-4000rpm离心10-15min，得沉淀，沉淀冷冻干燥，得酵母微囊（YGM）粉末；

（5）微纳米递药系统的构建：PLA-mPLL/BUD纳米粒溶于超纯水中，按纳米粒与酵母微囊（YGM）质量比为0.6-1加入酵母微囊（YGM），涡旋混合均匀，室温孵育0.5-2h，4000rpm离心5-10min，冷冻干燥得粒径3-6μm的CO₂响应性微纳米递药系统（YGM/PLA-mPLL/BUD）。