[发明专利]一种桑黄活性成分的制备方法及其在辅助降血糖药物中的应用

权利要求书

1.一种具有降血糖的桑黄活性成分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取发酵10-12d的桑黄菌株发酵液，将菌丝体过滤，分离得到桑黄发酵液加热浓缩，加95 %的乙醇浸泡处理24 h，分层后，5000 rpm，5 min离心处理，收集上清液，用旋转蒸发仪进行乙醇回收，收集醇溶物，加水溶解后-20℃冷冻，真空冷冻干燥处理后粉碎既得桑黄发酵液醇溶样；

（2）桑黄发酵液醇溶样依次使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇四种有机溶剂进行分级萃取，得到石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物；

其中所述桑黄菌株Sanghuangporus sanghuang保藏编号为CGMCC NO.21068。

2.一种具有降血糖的桑黄活性成分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取发酵10-12d的桑黄菌株发酵液，将菌丝体过滤，分离得到桑黄发酵液加热浓缩，加95 %的乙醇浸泡处理24 h，分层后，5000 rpm，5 min离心处理，收集上清液，用旋转蒸发仪进行乙醇回收，收集醇溶物，加水溶解后-20℃冷冻，真空冷冻干燥处理后粉碎既得桑黄发酵液醇溶样；

（2）桑黄发酵液醇溶样分别用石油醚和氯仿体积比 1:1 的混合溶剂，氯仿和乙酸乙酯体积比2:3的混合溶剂，石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇体积比2:2:3:3的混合溶剂萃取，依次获得1:1混和溶剂萃取物1，2:3混和溶剂萃取物2，2:2:3:3混和溶剂萃取物3；

其中所述桑黄菌株Sanghuangporus sanghuang保藏编号为CGMCC NO.21068。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中桑黄发酵液醇溶样与石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇的体积比为1：1-5。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇的萃取时间分别为2h。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇的萃取次数比2：2：6：8。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的桑黄菌株发酵液的发酵过程为：液体菌种接种量5-10%；培养的前2-3天，温度设定27-29℃，转速110r/min，避光振荡培养；培养的第3-8天，温度设定25-27℃，转速130-150r/min，避光振荡培养；培养的第8-12天，温度设定23-25℃，转速110-120r/min，避光振荡培养。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的液体菌种的制备方法为：

（1）无菌条件下将斜面菌种接种于固体培养基中，接种块面积为1 cm²，接种完成后，27℃避光静置培养5-7 d；

（2）于500 mL三角瓶里装入250 mL体积的液体培养基，接种活化后的1 cm²平板菌种块10块，26-28 ℃，150 rpm进行发酵活化培养7 d，获得初步发酵液体菌种；

（3）采用500 mL三角瓶装入250 mL体积的液体培养基，无菌操作接种，接种量10 mL，25-29 ℃，110-150 rpm恒温深层发酵培养10 d备用。