[发明专利]一种咖啡酸苯乙酯的分析方法

说明书

本发明提供了一种咖啡酸苯乙酯的分析方法，该分析方法包括对化学合成的药用咖啡酸苯乙酯的待测试物进行HPLC分析，其中HPLC分析的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相A为磷酸二氢钠缓冲溶液，流动相B为甲醇。该方法得到的色谱图中咖啡酸苯乙酯的峰形清晰、重现性好，且该方法具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高等特点。

技术领域

本发明涉及咖啡酸苯乙酯的检测技术领域，具体而言，涉及一种化学合成的药用咖啡酸苯乙酯的分析方法。

背景技术

蜂胶的化学成分非常复杂，长期以来，由于不能确定蜂胶的功能性成分，影响了蜂胶在现代医药上的应用。咖啡酸苯乙酯已经被鉴定为蜂胶中的主要组分之一，而且具有的药理活性非常广泛。咖啡酸苯乙酯的分子式为C17H16O4，化学结构式如下：

其结构中含有多酚羟基基团，具有清除自由基的潜在功能。有文献报道，邻二酚羟基结构具有体内抗氧化作用。研究表明，含有咖啡酸苯乙酯的蜂胶乙醇提取液可以抑制角叉菜胶诱导的佐剂性关节炎、胸膜炎和大鼠足肿胀，而不含咖啡酸苯乙酯的提取液不具有这一活性，说明咖啡酸苯乙酯是发挥抗炎作用的主要组分。由于咖啡酸苯乙酯具有极强的抗炎和抗氧化活性，从而可以起到抗肿瘤的作用，所以在医学上具有广阔的应用前景。

中国专利申请201711457604.9公开了一种软胶囊标志性成分的检测方法，它是通过HPLC测定人参蜂胶软胶囊中7种标志性成分的方法，其中的一种成分为咖啡酸苯乙酯。该方法主要针对的是人参蜂胶软胶囊中咖啡酸苯乙酯含量的检测方法，所存在的问题是，流动相A为0.15％磷酸溶液，其缓冲能力较差，获得的咖啡酸苯乙酯和杂质的峰形不佳；流动相B为乙腈，其洗脱能力较强，难以将咖啡酸苯乙酯与杂质有效地进行分离。总体来说，该发明对于杂质分析专属性较差，峰形不佳。因此，本领域迫切需要一种针对化学合成的药用咖啡酸苯乙酯有关物质进行检测的可靠的分析方法，以实现对化学合成的药用咖啡酸苯乙酯质量进行有效的控制。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种咖啡酸苯乙酯的分析方法，以解决现有技术中采用HPLC分析方法难以达到咖啡酸苯乙酯与杂质的有效分离的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种咖啡酸苯乙酯的分析方法，包括对化学合成的药用咖啡酸苯乙酯的待测试物进行HPLC分析，所述HPLC分析的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，所述HPLC分析的过程包括将所述含咖啡酸苯乙酯的待测试物在色谱柱中进行梯度洗脱，流动相包括流动相A磷酸二氢钠缓冲溶液和流动相B甲醇，所述磷酸二氢钠缓冲溶液的浓度为0.01mol/L～0.03mol/L，用磷酸调pH值为2-4。

梯度洗脱条件为0-70min，35％B→70％B；70-80min，70％B；80.1-95min，35％B，所述梯度洗脱见表1。

表1

所述磷酸二氢钠缓冲溶液和甲醇流动相的起始比例体积比为30:70:～40:60，优选体积比为35:65。

所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱的填料粒度为3μm、5μm，优选为5μm。

所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱的柱长为250mm，所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱的柱内径为4.6mm。

所述HPLC分析的检测波长为210～220nm，优选为215nm。

所述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱的进样量为10～30μL，优选为20μL。色谱柱都有一定的承载量，进样量小于特定色谱仪的灵敏度会导致无法准确定量，进样量太大会导致过载，不仅损害色谱柱，还导致峰型拖尾，因此，为更精确地适应本申请的上述十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对咖啡酸苯乙酯的有效分析，优选上述范围内的进样量。