[发明专利]基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒及其制备方法以及其用于制备纳米疫苗的用途

权利要求书

1.一种基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）将阳离子脂质体溶解在有机溶剂中以形成0.1-5 mM的阳离子脂质体溶液；

（2）将聚乙烯醇溶解在水性溶剂中以形成0.1-20 mg/ml的聚乙烯醇水性溶液，所述水性溶剂选自超纯水、DMEM培养基和磷酸缓冲盐溶液或它们中的两种或更多种的混合物；

（3）将肿瘤细胞来源的细胞膜分散在极性有机溶剂中以成为肿瘤细胞膜分散体，其中每毫升分散体中包含1×106个至1×107个肿瘤细胞来源的细胞膜；

（4）提供流感病毒水性溶液，其中每毫升包含1×105个至1×106个流感病毒；

（5）在超声条件下将所述阳离子脂质体溶液、所述流感病毒水性溶液、所述肿瘤细胞膜分散体以及所述聚乙烯醇水性溶液混合得到均匀混合液，其中，阳离子脂质体的微摩尔数为a，流感病毒个数为b×106，肿瘤细胞来源的细胞膜个数为c×106，聚乙烯醇的毫克数为d，并且a : b =（0.2-10）:1、b : c =1 :（0.1-6）、b : d =1 :（0.1-20）；

（6）将所述均匀混合液蒸发至干以形成残余物；

（7）将所述残余物分散在超纯水或者DMEM培养基中以形成基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述超声条件为：温度T℃，功率M瓦，以持续K秒、停止L秒的周期持续超声N分钟，其中，0℃＜T≤8℃、140瓦≤M≤210瓦、0秒＜K≤5秒、0秒＜L≤15秒、0＜N≤30分钟。

3.根据权利要求1或2所述的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法，其特征在于，其中所述流感病毒选自已知能激活天然免疫的病毒毒株。

4.根据权利要求1或2所述的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法，其特征在于，其中所述流感病毒选自WSN病毒株、PR8病毒株、SeV病毒株或它们中的两种或更多种的混合物。

5.根据权利要求1或2所述的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述肿瘤细胞选自黑色素瘤B16F10细胞、乳腺癌4T1细胞、卵巢癌细胞、肺癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、甲状腺癌细胞或它们中的两种或更多种的混合物。

6.根据权利要求1或2所述的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述阳离子脂质体选自DOTAP、DTAB、TTAB、CATB、DDAB、DOTMA、DOSPA或它们中的两种或更多种的混合物。

7.根据权利要求1或2所述的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、DMSO、MSM、DMF、DMAC或它们中的两种或更多种的混合物。

8.根据权利要求1或2所述的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述的极性有机溶剂选自DMSO、MSM、DMF、DMAC或它们中的两种或更多种的混合物。

9.一种通过权利要求1至8中任意一项所述的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法制备的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒。

10.根据权利要求9所述的基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒用于制备基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米疫苗的用途。