[发明专利]基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒及其制备方法以及其用于制备纳米疫苗的用途

说明书

本发明涉及一种基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒及其制备方法，具体为在超声条件下将阳离子脂质体溶液、流感病毒水性溶液、肿瘤细胞膜分散体以及聚乙烯醇水性溶液混合得到均匀混合液，所述混合液蒸发至干的残余物再溶解于超纯水或者DMEM培养基即可得到所述纳米颗粒。其中，流感病毒在体内可以激发全身免疫系统产生细胞因子风暴，并使在肿瘤治疗中具有重要作用的树突状细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞等被大量激活，随后大幅提高T细胞的增值效率；从肿瘤细胞膜可以获得包含促进肿瘤抗原特异性免疫反应所需的信号，启动T细胞，可用于控制肿瘤生长，所述基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒可全身性激活机体免疫功能，使肿瘤治疗更加高效。

技术领域

本发明属于纳米制剂制备领域。更具体地，涉及一种基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒及其制备方法。

背景技术

癌症是人类面临的最大挑战之一，现代医学已经跟癌症战斗了几十年，从最初对它的一无所知，到后来的手术切除，再到后来的放化疗以及靶向药，人类的治疗技术每迈进一步，癌细胞总能进一步找到藏身之处。近年来，我国肿瘤的发病率和死亡率不断走高，尤其是在城市居民中，癌症已成为威胁居民健康的头号杀手。免疫疗法是当今最火热的癌症治疗方式，被誉为癌症治疗的第三次革命，到目前为止，免疫治疗已经发展出了多种形式：靶向抗体、癌症疫苗、过继细胞疗法、溶瘤病毒、免疫检查点抑制剂、细胞因子和免疫佐剂。免疫治疗主要通过激活人体免疫系统，依靠自身免疫机能杀灭癌细胞和肿瘤组织，从而达到治疗癌症的作用，是治疗肿瘤最有效的方法之一。在免疫治疗领域，以疫苗为基础的治疗方法是一种效果显著的治疗手段，因为疫苗疗法可以诱导和扩增针对抗原的免疫细胞，细菌类和病毒类疫苗已经拯救了数千万人类的性命。

但是肿瘤疫苗的研发和治疗效果并没有达到理想中的预期，原因是不同个体内的肿瘤细胞具有不同的抗原蛋白表达谱，而不同个体的免疫细胞也具有不同的免疫细胞应答谱，因此在疫苗的设计过程中抗原的选择方案难以统一，并且肿瘤细胞具有免疫逃逸能力，一旦个体的肿瘤细胞下调或沉默疫苗相关抗原，则会导致已经设计好的肿瘤疫苗很难再次发挥作用，因此，如何设计理想的肿瘤疫苗显得尤为重要。

发明内容

发明要解决的问题

基于背景技术部分所述的问题，本发明的目的在于设计并制备一种能够更高效治疗肿瘤的肿瘤疫苗。

用于解决问题的方案

本发明提供一种基于流感病毒的肿瘤联合免疫纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将阳离子脂质体溶解在有机溶剂中以形成约0.1-5mM的阳离子脂质体溶液；

(2)将聚乙烯醇(PVA，优选重均分子量85,000-124,000)溶解在水性溶剂中以形成约0.1-20mg/ml的聚乙烯醇水性溶液，其中所述的水性溶剂选自超纯水、DMEM(dulbecco'smodified eagle medium)培养基和磷酸缓冲盐溶液(PBS)或它们中的两种或更多种的混合物；

(3)将肿瘤细胞来源的细胞膜分散在极性有机溶剂中以成为肿瘤细胞膜分散体，其中每毫升分散体中包含约1×10⁶个至1×10⁷个肿瘤细胞来源的细胞膜；

(4)提供流感病毒水性溶液，其中每毫升包含约1×10⁵个至1×10⁶个流感病毒；