[发明专利]一种用于核酸片段化的酶组合物及其应用

权利要求书

1.一种用于核酸片段化的酶组合物，其特征在于，所述酶组合物包括以下组合中的任意一种：

（1）核酸内切酶DNaseI 1×10^-3U/μL~2×10^-3U/μL、DNA聚合酶I大片段Klenow 3U/μL、Taq DNA聚合酶0.2U/μL和T4多聚核苷酸激酶0.5U/μL的组合；

（2）T7核酸内切酶 0.05U/μL、核酸内切酶Vvn 10ng/μL、DNA聚合酶I 1~5U/μL、Taq DNA聚合酶0.2U/μL和T4多聚核苷酸激酶0.5U/μL的组合；

（3）T7核酸内切酶0.005U/μL、核酸内切酶Vvn 1~10ng/μL、DNA聚合酶I大片段Klenow3U/μL、Taq DNA聚合酶0.2U/μL和T4多聚核苷酸激酶0.5U/μL的组合，且不包括T4 GP32；

（4）核酸内切酶Vvn 2~10ng/μL、DNA聚合酶I大片段Klenow 3U/μL、Taq DNA聚合酶0.2U/μL和T4多聚核苷酸激酶0.5U/μL的组合，且不包括T4 GP32；

（5）T7核酸内切酶0.05U/μL、核酸内切酶Vvn 10ng/μL、DNA聚合酶I大片段Klenow 1~5U/μL、Taq DNA聚合酶0.2U/μL和T4多聚核苷酸激酶0.5U/μL的组合。

2.根据权利要求1所述的用于核酸片段化的酶组合物，其特征在于，所述酶组合物为组合物（1），并且其中核酸内切酶DNaseI的浓度选自1×10^-3U/μL、1.5×10^-3U/μL或2×10^-3U/μL。

3. 根据权利要求1所述的用于核酸片段化的酶组合物，其特征在于，所述酶组合物为组合物（2），并且其中DNA聚合酶I的浓度选自1 U/μL、3 U/μL或5U/μL。

4.根据权利要求1所述的用于核酸片段化的酶组合物，其特征在于，所述酶组合物为组合物（3），并且其中核酸内切酶Vvn 的浓度选自1ng/μL、5ng/μL或10ng/μL。

5.根据权利要求1所述的用于核酸片段化的酶组合物，其特征在于，所述酶组合物为组合物（4），并且其中核酸内切酶Vvn的浓度选自2ng/μL、5ng/μL或10ng/μL。

6.根据权利要求1所述的用于核酸片段化的酶组合物，其特征在于，所述酶组合物为组合物（5），并且其中DNA聚合酶I大片段Klenow的浓度选自1U/μL、3U/μL或5U/μL。

7.一种用于构建测序文库的酶反应液，其特征在于，所述酶反应液包括权利要求1-6任一项所述的酶组合物。

8.根据权利要求7所述的用于构建测序文库的酶反应液，其特征在于，所述酶反应液还包括缓冲液。

9.一种测序文库的构建方法，其特征在于，所述方法包括：

将靶核酸加入权利要求7所述的酶反应液中，孵育，进行靶核酸的片段化、末端修复、5’磷酸化和3’加A尾。

10. 根据权利要求9所述的测序文库的构建方法，其特征在于，所述孵育的条件为35~40℃保持10~20 min，60~70℃保持20~40 min。

11.根据权利要求9所述的测序文库的构建方法，其特征在于，所述方法还包括将孵育产物与测序接头进行连接反应，将连接产物进行PCR，得到测序文库的步骤。

12.一种用于构建测序文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-6任一项所述的酶组合物和/或权利要求7所述的酶反应液。

13.根据权利要求12所述的用于构建测序文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括测序接头、连接反应试剂或PCR试剂中的任意一种或至少两种的组合。