[发明专利]一种构建KLF12高表达小鼠的方法及在构建非叶酸依赖的神经管缺陷小鼠模型的应用

权利要求书

1.一种非叶酸依赖的神经管缺陷小鼠模型的构建方法，其特征在于：包括如下步骤，

将Rosa26^Klf12/Klf12小鼠与Sox^Cre雌鼠交配，获得的KLF12高表达胚胎即为非叶酸依赖的神经管缺陷小鼠模型；

所述Rosa26^Klf12/Klf12小鼠为根据Klf12基因序列，利用Cre-loxP基因重组技术构建；具体构建步骤如下：

（1）根据Klf12基因，构建打靶载体，所述打靶载体的序列如SEQ ID NO.1所示；

（2）ES细胞筛选：复苏MEFs，制作Feeder，复苏ES并传代，用所述打靶载体进行电转，加抗生素筛选后培养，筛选3’和5’端均阳性的克隆细胞；所述筛选3’和5’端均阳性的克隆细胞时，采用的引物序列分别如SEQ ID NO.9~ SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.10~ SEQ IDNO.11所示；

（3）囊胚注射：体外培养2.5d的胚胎，囊胚注射步骤（2）中筛选的3’和5’端均阳性的克隆细胞至胚胎内，体外培养后移植到假孕雌鼠体内，至嵌合鼠诞生作为Founder鼠配种繁殖，通过基因型鉴定可得Rosa26^Klf12/Klf12小鼠。

2.如权利要求1所述的非叶酸依赖的神经管缺陷小鼠模型的构建方法，其特征在于：所述雌鼠为Sox2^Cre。

3.如权利要求1所述的构建KLF12条件性高表达小鼠的方法，其特征在于：所述打靶载体构建过程中使用的序列包括如SEQ ID NO.9~ SEQ ID NO.21所示序列。

4.权利要求1或2所述的非叶酸依赖的神经管缺陷小鼠模型的应用：其特征在于：在筛选治疗性候选药物、保健品中的应用。