[发明专利]一种鉴定杏果皮毛性状的Indel标记、引物、应用和方法有效
申请号: | 202110184662.9 | 申请日: | 2021-02-10 |
公开(公告)号: | CN112746129B | 公开(公告)日: | 2022-09-09 |
发明(设计)人: | 乌云塔娜;黄梦真;王淋;刘慧敏;朱高浦;赵罕;朱绪春;徐宛玉;王楚;苟宁宁;陈晨;白海坤 | 申请(专利权)人: | 中国林业科学研究院经济林研究所 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/6869;C12N15/11 |
代理公司: | 北京冠榆知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11666 | 代理人: | 朱亚琦 |
地址: | 450003*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鉴定 果皮 性状 indel 标记 引物 应用 方法 | ||
1.一种鉴定杏果皮毛性状的Indel标记,其特征在于,杏基因组第5染色体的第15454598位核苷酸,该核苷酸为T或纯合缺失;Indel标记的序列如SEQ ID NO.1所示,其中R为T或纯合缺失。
2.根据权利要求1所述的一种鉴定杏果皮毛性状的Indel标记,其特征在于,由于引物两端不稳定,Indel标记序列的SEQ ID NO.1的中间稳定序列如SEQ ID NO.4所示,其中R为T或纯合缺失。
3.用于鉴定权利要求1-2任一所述杏果皮毛性状的Indel标记的引物,其特征在于,上游引物的序列如SEQ ID NO.2所示,下游引物的序列如SEQ ID NO.3所示。
4.鉴定杏果皮毛性状的Indel标记的应用,其特征在于,Indel标记用于鉴定杏果皮毛性状,Indel标记的序列SEQ ID NO.1中,如果R为T,则为有果皮毛杏,如果R为纯合缺失,则为无果皮毛杏。
5.鉴定杏果皮毛性状的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)提取待测杏基因组DNA;
(2)以待测杏基因组DNA为模板,利用权利要求3所述引物对进行扩增,得到PCR扩增产物;
(3)对扩增产物进行Sanger测序;
(4)鉴定果皮毛性状。
6.根据权利要求5所述的鉴定杏果皮毛性状的方法,其特征在于,在步骤(2)中:扩增体系为:基因组DNA模板3μL,上游引物和下游引物各0.75μL、浓度均为10μmol/L,Premix Taq15μL,无菌水10.5μL,供给30μL。
7.根据权利要求5所述的鉴定杏果皮毛性状的方法,其特征在于,在步骤(2)中:扩增反应程序为:94℃预变性3min,94℃变性30S,55℃退火30S,72℃延伸30S,共33个循环,最后72℃延伸7min,于16℃保存。
8.根据权利要求5所述的鉴定杏果皮毛性状的方法,其特征在于,在步骤(2)中:待测杏样品的扩增产物取5μL,用1.0%的琼脂糖凝胶电泳检测是否扩增出目的片段。
9.根据权利要求5所述的鉴定杏果皮毛性状的方法,其特征在于,在步骤(4)中:在PCR扩增的稳定序列SEQ ID NO.4中的R位置出现缺失,即第106bp的位置出现缺失,则为无果皮毛杏;若在PCR的稳定序列SEQ ID NO.4中的R位置为T,即第106bp的位置为T,则为有果皮毛杏。
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