[发明专利]一个兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双价弱毒疫苗在审
| 申请号： | 202110185727.1 | 申请日： | 2021-02-11 |
| 公开（公告）号： | CN112877301A | 公开（公告）日： | 2021-06-01 |
| 发明（设计）人： | 原雪峰;刘珊珊;葛玉倩;于成明 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N7/04;C12N15/84;C12N15/66;A01N63/40;A01N63/60;A01P1/00;C12R1/94 |
| 代理公司： | 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 | 代理人： | 薛鹏喜 |
| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一个 黄瓜花叶病毒 烟草 花叶 病毒 双价弱毒 疫苗 | ||
1.一种兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双价弱毒疫苗，其特征在于，所述双价弱毒疫苗含有CMVFny分离物的突变型RNA2；所述CMVFny分离物的突变型RNA2是在CMVFny分离物的RNA2全长序列第2661位之后插入TAATAG以及一段烟草脉带花叶病毒的保守序列；所插入的烟草脉带花叶病毒的保守序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CMVFny分离物的突变型RNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.权利要求1所述的兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双价弱毒疫苗的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以CMVFny RNA2侵染性克隆质粒pCB301-CMVFny-R2为模板，利用反向PCR扩增技术获得中间载体pCCFR2-2bPTⅡ；所述中间载体pCCFR2-2bPTⅡ是2661位之后插入TAATAG，然后再依次引入BamH I、SpeI和Sma I酶切位点；
(2)利用酶切和连接方法将SEQ ID NO.1所示的烟草脉带花叶病毒的保守序列插入到中间载体pCCFR2-2bPTⅡ中，即构建得到兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双联弱毒疫苗pCCFR2-2bPTⅡ-TVB7600-7799。
3.权利要求1所述的兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双价弱毒疫苗在防治黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒中的应用。
4.一种防治黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求1所述的兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双价弱毒疫苗与含有CMVFny分离物的RNA1和RNA3的质粒混合接种。
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