[发明专利]一个兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双价弱毒疫苗

说明书

本发明公开了一种兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双价弱毒疫苗，所述双价弱毒疫苗含有CMV_Fny分离物的突变型RNA2；所述CMV_Fny分离物的突变型RNA2是在CMV_Fny分离物的RNA2全长序列第2661位之后插入TAATAG以及一段烟草脉带花叶病毒的保守序列；所插入的烟草脉带花叶病毒的保守序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CMV_Fny分离物的突变型RNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。将本发明的双价弱毒疫苗与含有CMV_Fny分离物RNA1和RNA3的质粒混合接种，可以预防黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的危害，为田间防治CMV和TVBMV引起的植物病毒病提供了疫苗材料和有效防治措施。

技术领域

本发明涉及植物病毒学和分子生物学技术领域，具体涉及一个兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双价弱毒疫苗及其在防治黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒中的应用。

背景技术

烟草病毒病是全世界烟草栽培地区普遍发生的一类侵染性病害，具有种类多、分布广的特点，烟草病毒侵染烟草后，能够使烟株光合作用下降，烟株叶片畸形甚至停止生长。据调查，每年我国因烟草病毒病造成的烟叶损失达20％以上，严重者甚至整块烟田绝收，给烟草生产造成巨大损失。复合侵染是烟草病毒病的发病特点，两种或多种病毒复合侵染成为病毒危害的主要方式，症状更加复杂与严重，使诊断和防治更加困难。单独防治一种病害往往效果不好，因此，设计能够同时抗多种病毒的策略尤为重要。

黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)属于雀麦花叶病毒科(Bormoviridae)黄瓜花叶病毒属(Cuucmovirus)，是目前已知的寄主范围最广的植物病毒之一，可侵染100多科1200多种植物(Mochizuki et al.,2012)。主要通过蚜虫以非持久性方式进行传播，还可以通过机械摩擦、种子、寄生植物进行传毒(Chaudhry et al.,1998)。在我国各大烟区，CMV发生普遍，在烟草的整个生育期均可侵染，通常苗期侵染，生长中期达到发病高峰。CMV是造成烟草花叶的主要病原，造成植株矮化和畸形严重，叶片出现花叶和坏死，也有黄绿相间的斑驳，严重时叶片变薄，严重影响烟草的质量与产量。烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus，TVBMV)属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)中的马铃薯Y病毒属(Potyvirus)，TVBMV侵染烟草主要发生在生长旺期，通过蚜虫以非持久方式进行传播，烟草叶片表现为脉带花叶，深绿色斑块。

对于植物病毒病的防治，最有效的方法是抗病品种的筛选与培育，但其存在育种周期长、抗病品种抗性易丧失等不足。另一种方法是弱毒交叉保护，是利用弱毒突变体侵染，诱导植物自身的免疫系统而防治后期侵染的同样类型强病毒株系；是一种有效的病毒防治策略。弱毒突变体可以是天然存在的，也可以通过分子生物学手段进行人工制备。

一种弱毒突变体，只能用来防治对应的强病毒。如果想同时防治不同的病毒，就需要几种不同类型的弱毒突变体。但可以通过在一个骨架病毒中插入异源病毒片段，来达到既防治骨架病毒，又防治插入片段对应的病毒的效果，这种突变型病毒就是多价弱毒疫苗。以黄瓜花叶病毒为基础病毒载体，能够兼抗黄瓜花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的双价弱毒疫苗目前还未见有报道。

发明内容

针对上述研究背景，本发明的目的是提供一种兼抗CMV和TVBMV的双价弱毒疫苗，为田间防治CMV和TVBMV引起的植物病毒病提供了疫苗材料和有效防治措施。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：