[发明专利]基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型、构建方法及应用

权利要求书

1.一种基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤一，实验材料准备：

预制条件性位置偏爱鱼缸，其中所述条件性位置偏爱鱼缸通过挡板分隔为体积相等的两个缸，包括棕色缸以及白色缸；

步骤二，基线测定：

将斑马鱼在抽出挡板的条件性位置偏爱鱼缸中适应性喂养2天，控制条件性位置偏爱鱼缸中的水位不低于5cm，于第3天观察15min，以头部位置为准记录斑马鱼在所述棕色缸或白色缸中的停留时间，并根据停留时间确定斑马鱼的偏爱缸或非偏爱缸；

步骤三，药物干预及行为学指标测定：

分组：将基线测定合格的斑马鱼分成空白对照组以及甲基苯丙胺组；

一次观察：于第1天，观察斑马鱼在白色缸内的停留时间以及在条件性位置偏爱鱼缸内的运动轨迹；

训练：对于甲基苯丙胺组，分别于第2天、第4天与第6天注射甲基苯丙胺后将斑马鱼放入白色缸中进行训练；在第3天与第5天注射鱼用生理盐水后将斑马鱼放入棕色缸中进行训练；对于空白对照组，每天对应注射等体积的鱼用生理盐水；

二次观察：分别在第7天通过测定斑马鱼在白色缸中的停留时间、运动轨迹以及运动总路程确定经甲基苯丙胺干预后的斑马鱼对应的位置偏爱。

2.根据权利要求1所述的基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型构建方法，其特征在于，在所述步骤一中，所述条件性位置偏爱鱼缸的体积为16cm×9cm×9cm，挡板的高度为9cm。

3.根据权利要求2所述的基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型构建方法，其特征在于，在所述步骤二中，以所述棕色缸作为偏爱缸，以所述白色缸作为非偏爱缸，所述非偏爱缸即为伴药缸；

在后续基线测定实验中，以斑马鱼在偏爱缸中的停留时间至少为8min作为合格标准，以剔除对伴药缸存在偏爱的斑马鱼。

4.根据权利要求3所述的基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型构建方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述分组步骤具体包括：

将基线测定合格的斑马鱼60条，称重，随机分为空白对照组以及甲基苯丙胺组，其中甲基苯丙胺组按照注射剂量不同分为10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg以及80mg/kg共5组，每组10条，雌雄各半。

5.根据权利要求4所述的基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型构建方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述一次观察步骤具体包括：

于正式实验第1天，测定斑马鱼15min内于白色缸内的停留时间，并利用动物行为追踪分析系统软件追踪斑马鱼在条件性位置偏爱鱼缸中的运动轨迹。

6.根据权利要求4所述的基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型构建方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述训练步骤具体包括：

对于甲基苯丙胺组；

于正式实验第2天、第4天以及第6天，将斑马鱼浸入50mg/L的三卡因间氨苯酸乙脂甲磺酸盐溶液中进行麻醉，在各斑马鱼的腹腔内按照10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg以及80mg/kg的标准分别注射甲基苯丙胺，再将注射甲基苯丙胺后的各斑马鱼放入条件性位置偏爱鱼缸水中30s；

待斑马鱼麻醉恢复后，将各斑马鱼放入白色缸内40min，通过挡板将条件性位置偏爱鱼缸的内部分隔开，训练结束后将各斑马鱼移至蓝色环境鱼缸中并清洗条件性位置偏爱鱼缸；

于正式实验第3天以及第5天，对各斑马鱼的腹腔注射与甲基苯丙胺相同体积的鱼用生理盐水，将注射鱼用生理盐水后的各斑马鱼放入棕色缸内40min。

7.根据权利要求6所述的基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型构建方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述训练步骤具体包括：

对于空白对照组，每天对各斑马鱼，在同一时间对应注射与甲基苯丙胺等体积的鱼用生理盐水。