[发明专利]基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型、构建方法及应用

说明书

本发明涉及一种基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型、构建方法及应用，该方法包括：预制条件性位置偏爱鱼缸；将斑马鱼在抽出挡板的鱼缸中适应性喂养2天，于第3天观察15min，以头部位置为准记录斑马鱼在棕色缸或白色缸中的停留时间，并根据停留时间确定斑马鱼的偏爱缸或非偏爱缸；将基线测定合格的斑马鱼分成空白对照组以及甲基苯丙胺组；于第2、4、6天注射甲基苯丙胺后放入白色缸中进行训练；在第3、5天注射鱼用生理盐水后放入棕色缸中进行训练；在第7天通过测定斑马鱼在白色缸中的停留时间、运动轨迹以及运动总路程确定位置偏爱。本发明可建立甲基苯丙胺依赖致认知功能损伤斑马鱼模型，便于对斑马鱼的偏爱及空间线索记忆进行深入研究。

技术领域

本发明涉及动物模型构建技术领域，特别涉及一种基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型、构建方法及应用。

背景技术

斑马鱼是辐鳍亚纲鲤科短担尼鱼属的一种硬骨鱼，其生物结构和生理功能与哺乳动物高度相似，与人类基因同源性高达87％。其中，斑马鱼具有体积小、发育周期短、产卵量高、早期胚胎发育透明等特点。斑马鱼具有脊椎动物保守的神经系统构造以及丰富的行为模式，且幼龄斑马鱼脑部透明且结构简单，已日益成为神经系统疾病研究的理想动物模型。

近年来，斑马鱼也逐渐被应用于毒瘾医学以及认知功能研究领域。与大、小鼠等哺乳类动物相比较，斑马鱼用于药物成瘾及认知功能研究，具有如下优势：(1)斑马鱼成鱼器官与系统的简单性和复杂性之间具有良好的平衡，能更准确地反应药物对动物行为的影响。对于一些在大小鼠实验中难以观察到的行为改变和生理表现，如应激行为、潜水行为、侵略行为以及趋光反应等，斑马鱼有较明显的表现，且容易观察；(2)斑马鱼体积小，重量轻，用药量少，能明显减少实验用成瘾性物质，节约药物资源；(3)斑马鱼繁殖能力强，周期短，能明显缩短实验周期；(4)幼龄斑马鱼脑部透明，易于进行活体观察。

随着行为学跟踪检测系统、转基因及活体成像等技术的广泛应用，斑马鱼已成为研究药物成瘾和认知功能的良好模式生物。药物成瘾是一种慢性、复发性脑病，具有强迫性的觅药行为及持续性渴求等特点。甲基苯丙胺也是一种较为常见的成瘾药物，但现有技术中，对甲基苯丙胺对斑马鱼的运动行为以及认知损伤，缺乏较为系统的研究与评价。基于此，有必要提出一种基于甲基苯丙胺认知损伤的动物模型构建方法，以对此进行深入研究。

发明内容

基于此，本发明的目的是为了解决现有技术中，对甲基苯丙胺对斑马鱼的运动行为以及认知损伤，缺乏较为系统的研究与评价的问题。

本发明提出一种基于甲基苯丙胺认知损伤研究的动物模型构建方法，其中，所述方法包括如下步骤：

步骤一，实验材料准备：

预制条件性位置偏爱鱼缸，其中所述条件性位置偏爱鱼缸通过挡板分隔为体积相等的两个缸，包括棕色缸以及白色缸；

步骤二，基线测定：

将斑马鱼在抽出挡板的条件性位置偏爱鱼缸中适应性喂养2天，控制条件性位置偏爱鱼缸中的水位不低于5cm，于第3天观察15min，以头部位置为准记录斑马鱼在所述棕色缸或白色缸中的停留时间，并根据停留时间确定斑马鱼的偏爱缸或非偏爱缸；

步骤三，药物干预及行为学指标测定：

分组：将基线测定合格的斑马鱼分成空白对照组以及甲基苯丙胺组；

一次观察：于第1天，观察斑马鱼在白色缸内的停留时间以及在条件性位置偏爱鱼缸内的运动轨迹；

训练：对于甲基苯丙胺组，分别于第2天、第4天与第6天注射甲基苯丙胺后将斑马鱼放入白色缸中进行训练；在第3天与第5天注射鱼用生理盐水后将斑马鱼放入棕色缸中进行训练；对于空白对照组，每天对应注射等体积的鱼用生理盐水；

二次观察：分别在第7天通过斑马鱼在白色缸中的停留时间、运动轨迹以及运动总路程确定经甲基苯丙胺干预后的斑马鱼对应的位置偏爱。