[发明专利]调控强度弱化的酵母菌启动子及其在代谢通量调控中的应用

权利要求书

1.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子为在酵母内源启动子的CAAT框和TATA框之间插入异源顺式调控元件、和/或在所述酵母内源启动子的TATA框的下游插入异源顺式调控元件，获得的调控强度降低或减弱的重组启动子；或者

所述DNA分子为用异源顺式调控元件替换所述酵母内源启动子中的甾醇响应元件、和/或在所述酵母内源启动子的TATA框下游插入异源顺式调控元件、和/或在所述酵母内源启动子的甾醇响应元件和TATA框之间插入异源顺式调控元件，获得的调控强度降低或减弱的重组启动子；

所述异源顺式调控元件是大肠杆菌阻遏蛋白MarR的DNA结合序列marO，所述marO的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.根据权利要求1所述的DNA分子，其特征在于所述DNA分子为下述P1)、P2)、P3)、P4)的任一种：

P1)所述DNA分子中，所述酵母内源启动子为酿酒酵母角鲨烯单加氧酶基因ERG1启动子ERG1p，其核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

P2)所述DNA分子为ERG1p-M5、ERG1p-M4、ERG1p-M1、ERG1p-M6、ERG1p-M3或ERG1p-M2；

所述ERG1p-M5的序列如SEQ ID No.11或SEQ ID No.11的第9-506位所示，

所述ERG1p-M4的序列如SEQ ID No.10或SEQ ID No.10的第9-506位所示，

所述ERG1p-M1的序列如SEQ ID No.7或SEQ ID No.7的第9-494位所示，

所述ERG1p-M6的序列如SEQ ID No.12或SEQ ID No.12的第9-532位所示，

所述ERG1p-M3的序列如SEQ ID No.9或SEQ ID No.9的第9-520位所示，

所述ERG1p-M2的序列如SEQ ID No.8或SEQ ID No.8的第9-520位所示，

P3)所述DNA分子中，所述酵母内源启动子为酿酒酵母乙醇脱氢酶基因ADH1启动子ADH1p，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

P4)所述DNA分子为ADH1p-M3、ADH1p-M2或ADH1p-M1；

所述ADH1p-M3的序列如SEQ ID No.5或SEQ ID No.5的第11-742位所示，

所述ADH1p-M2的序列如SEQ ID No.4或SEQ ID No.4的第11-730位所示，

所述ADH1p-M1的序列如SEQ ID No.3或SEQ ID No.3的第11-730位所示。

3.生物材料，其特征在于，所述生物材料为下述B1)至B3)中的任一种：

B1)含有权利要求1-2中任一所述的DNA分子的重组DNA分子，

B2)含有权利要求1-2中任一所述的DNA分子的重组载体，

B3)含有权利要求1-2中任一所述的DNA分子的重组微生物、或含有B2)所述重组载体的重组微生物。

4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于，所述重组DNA分子的核苷酸序列如SEQID No.13所示。

5.权利要求1-2中任一所述的DNA分子在作为启动子中的应用。

6.权利要求1-2中任一所述的DNA分子或权利要求3-4所述的生物材料中所述的重组DNA分子在制备重组微生物中的应用。

7.一种制备角鲨烯的方法，其特征在于，所述方法使用重组酵母生产角鲨烯，所述重组酵母为将酿酒酵母基因组中的角鲨烯单加氧酶基因ERG1启动子ERG1p替换为权利要求2中P1)或P2)所述的DNA分子得到的重组菌。

8.权利要求1-2中任一所述的DNA分子在酵母代谢工程改造中的应用。