[发明专利]一种基于代谢组学鉴别有机牛奶和常规牛奶的方法

权利要求书

1.一种基于代谢组学鉴别有机牛奶和常规牛奶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）将有机牛奶和常规牛奶在相同的条件下进行样品预处理；

（2）通过高效液相色谱串联高分辨率质谱对经预处理的样品进行数据的采集获得代谢物检测多峰图；

（3）对色谱峰进行峰提取与校正，获取所有代谢物的相对峰面积与保留时间；

（4）进行主成分分析、正交偏最小二乘分析，筛选差异标志物，得到鉴别模型区分有机牛奶和常规牛奶；

（5）所述差异标志物通过与在线数据库比较进行识别；

所述高效液相色谱采用SCIEX ExionLC^TM系统，色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18；高效液相色谱的流动相A的组成为：正离子模式下为含0.1～0.2%甲酸的水溶液，负离子模式下为含3～5 mM乙酸铵的水溶液；高效液相色谱的流动相B的组成为：正离子模式下为含0.1～0.2%甲酸的乙腈溶液，负离子模式下为含3～5 mM乙酸铵的乙腈溶液；

所述高分辨率质谱采用SCIEX Triple TOF^TM 6600系统；所述高分辨率 质谱的条件为：雾化气为50psi；辅助干燥气为50psi；气帘气为5psi；温度为500℃；喷雾电压：正离子模式为5000V，负离子模式为-4500V；去簇电压：正离子模式为80V，负离子模式为-80V；其中上述条件中涉及的各个数值参数的浮动范围为该数值参数±10%；

所述高效液相色谱串联高分辨率质谱采用正离子与负离子2种模式进行，获取正、负离子2种模式情况下的差异标志物；在正离子模式下，差异标志物包括7-甲基鸟嘌呤、尿酸、苯乙酰甘氨酸、sn-甘油-3-磷酸胆碱、16-羟基十六酸、二十三烷酸、哌啶；在负离子模式下，差异标志物包括辛酸和癸烯酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机牛奶和常规牛奶来源于荷斯坦牛。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，样品预处理过程包括将牛奶样品或溶解后的奶粉样品以5000～6000 rpm离心20～30 min，取1～2 mL中层液体加入3～4倍体积的有机溶剂涡旋震荡，以 9000～10000 rpm离心10～15 min后取上清液过滤。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，溶解奶粉用去离子水进行，溶解时固液比为1:5～1:3 g/mL。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述过滤采用有机滤膜进行。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，滤膜的孔径为0.22 μm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（4）中，以变量重要性1，显著性水平0.05，差异倍数1.25或者＜0.80作为门槛值获取差异标志物。

8.根据权利要求1-7任一项所述方法获得的差异标志物作为鉴别荷斯坦牛有机牛奶和常规牛奶的标志物的应用。