[发明专利]一种蓝莓中花色苷的高效液相色谱检测方法

权利要求书

1.一种蓝莓中花色苷的高效液相色谱检测方法，所述花色苷包括飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、矮牵牛花素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵素-3-O-葡萄糖苷、芍药色素-3-O-葡萄糖苷和锦葵色素-3-O葡萄糖苷，其特征在于，具体为以下步骤：

将待测蓝莓样品进行预处理，得到蓝莓花青素待测溶液；

将所述蓝莓花青素待测溶液进行高效液相色谱分析，得到待测样品的色谱图，所述高效液相色谱分析的色谱条件为：

分析柱：C18柱；

流速：0.8mL/min；

检测波长：520nm；

检测温度：25℃；

进样体积：10μL；

检测时间：60min；

流动相：水相B为0.3wt％磷酸水溶液，有机相A为乙腈；

洗脱方式：梯度洗脱；0min，A:B＝9:91，20min，A:B＝10:90，30min，A:B＝11:89，40min，A:B＝13:87，50min，A:B＝14:86，58min，A:B＝10:90；

根据所述待测样品的色谱图与预定的标准谱图进行对比，用外标法以标准方程计算得到蓝莓中花色苷的含量，所述标准方程是以每种花色苷的质量浓度为自变量、峰面积为因变量的方程；

当所述待测蓝莓样品为蓝莓鲜果时，所述预处理包括以下步骤：

将所述蓝莓鲜果与复合酶混合后进行避光酶解，得到酶解产物，所述复合酶包括纤维素酶和果胶酶；

将所述酶解产物用提取剂提取，得到滤液，所述提取剂为含柠檬酸的75wt％的乙醇水溶液，所述提取剂中柠檬酸的体积百分含量为0.5～1.5％；

将所述滤液依次进行浓缩、乙酸乙酯萃取、合并下层、减压浓缩、过D101大孔吸附树脂、乙醇洗脱和冷冻干燥，得到蓝莓花青素提取物；

将所述蓝莓花青素提取物与溶剂混合，得到所述蓝莓花青素待测溶液；

当所述待测蓝莓样品为蓝莓花青素粉时，所述预处理包括以下步骤：取蓝莓花青素粉用30wt％甲醇溶液溶解；

当所述待测蓝莓样品为液态产品时，所述预处理包括以下步骤：将所述液态产品过0.22μm有机微孔滤膜过滤。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述蓝莓花青素待测溶液中6种花色苷的浓度独立地为0～50μg/mL，6种花色苷的最低检出限为0.010～0.035μg/mL，最低定量限为0.033～0.117μg/mL。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述C18柱为SB-C18，规格为5μm，4.6×250mm。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述复合酶中纤维素酶和果胶酶的质量比为1～4:1。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述蓝莓鲜果与复合酶的质量比为100:0.1～0.5。